波形蛋白(VIM)检测试剂盒

概述纯化方法

波形蛋白(VIM)检测试剂盒化学性质

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波形蛋白(VIM)检测试剂盒性质、用途与生产工艺

概述
Vimentin(波形蛋白，Vim)为极度保守的细胞骨架Ⅲ型中间丝蛋白，主要表达于中胚层起源的间充质细胞中，以多聚体纤维稳定存在。Vim单体仅溶于高离子序列溶液如尿素、阴离子表面活性剂、盐酸胍溶液等，分子量为53kDa，等电点5.05，在pH值7.2-7.4最稳定。Vim具有调节细胞分化、迁移、信号传导、凋亡以及自身抗原和细胞因子特性，在感染、肿瘤、自身免疫、固有免疫等方面显现复杂的功能，具有生物药品开发的广阔前景。
纯化方法
(1)粗提：解剖猪眼取晶状体，浸入粗提液后匀浆制得混悬液；将混悬液离心后弃上清液，取沉淀物重悬数次并离心；取沉淀物冻干制得粗提粉；
(2)精提：以精提液溶解步骤(1)中的粗提粉，离心后去沉淀，取上清液浓缩后得到精提物溶液；
(3)分离：取精提物溶液加载到预平衡的DEAESepharoseFF柱(二乙胺基乙基键合快流速琼脂糖凝胶弱阴离子交换柱)，先使用第一缓冲液洗脱大部分的42kDa杂蛋白，再使用第二缓冲液进行线性洗脱，收集馏分；
(4)纯化：对各馏分用10％SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶)电泳，做Western-Blot(免疫印迹法)实验进行蛋白成分检测；合并53kDa目标波形蛋白含量达80％以上的馏分，经透析、冻干即得纯化Vimentin粉。

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