9001-01-8

以猪胰为原料，经水抽提，DEAE-纤维素分批吸附，分别用2-乙基-6，9-二氨基吖啶乳酸盐、丙酮沉淀，再经羟基磷灰石柱层析、SephadexG-100凝胶过滤得产品。

方法一、猪颌下腺为原料
提取取新鲜或冷冻的猪颌下腺，洗净，除去脂肪等物，在绞肉机中绞碎。每100kg猪颌下腺浆加5倍水搅拌提取，用乙酸调Ph至4.5，加入600ml二甲苯防腐。提取12h后补加二甲苯600ml，用乙酸调节Ph值保持为4.5，继续提取12h，除掉上层悬浮脂肪，纱布过滤，再用尼龙布滤清，得提取液。
猪颌下腺H²O;HAc;二甲苯；Ph4.5→_提取提取液
吸附在不断搅拌下将提取液中加入事先用提取液调成浆的药用氢氧化铝干凝胶3.4kg，继续搅拌1h，再加入氢氧化铝干凝胶1.6kg，搅拌2h，静置过夜。虹吸弃去上层液，加入5倍于浆重的水搅拌洗涤，静置，虹吸弃去上层液。如此重复洗涤5～6次，直到上层液基本澄清为止。即得吸附浆。
提取液^{Al(OH0₃干凝胶}→_吸附吸附浆
洗脱称取吸附浆重量，按含水量（氢氧化铝浆重减去氢氧化铝重）的13.2g/L(1.32%)加入磷酸氢二铵，用氨水（8.6%）调节Ph为8.4，边搅拌边洗脱2h，在洗脱初期Ph出现降低，可随时用氨水（8.6%）调整Ph至保持8.4。再加入按含水量的10g/L（1%）氯化钠，继续搅拌10min，然后在每100ml的洗脱液的洗脱液中加入纯度为92%以上的乙醇49～50ml，静置过夜，次日经纸浆过滤，收集滤液。
吸附浆^{(NH₄)₂HPO₄;NH^3^)·H₂O;NH₄·H₂O;Ph8.4}→_洗脱洗脱液
沉淀、干燥滤液用乙酸（2mol/L）调Ph至6.7，在搅拌下，第100ml滤液中加入纯度92%以上的乙醇80ml。静置，待沉淀完全后，虹吸弃去上清液，离心，分离沉淀，沉淀用丙酮洗涤脱水，真空干燥，得粗品。
洗脱液^{C₂H₅OH;Ph6.7}→_{沉淀；干燥}粗制品
精制将粗品用25倍量的乙酸铵溶液（10%）溶解，使Ph至6.5～6.7,加入与该溶液等量的乙醇（95%）搅匀，冷藏，静置过夜。次日过滤，每升滤液中加入药用活性炭80g（8%），搅拌15min，过滤，滤液加3倍量的乙醇（95%），冷藏静置，离心，分离沉淀，沉淀物用丙酮先涤，脱水，真空干燥，得精制品。总收率是4500U/kg（对新鲜颌下腺计）。粗制品^{(NH₄)Ac;C₂H₅OH;Ph6.5}→_{纯化；去杂蛋白}清液^{活性炭→_去热原精制液
C₂H₅OH→_沉淀沉淀物丙酮→_干燥精制成品
方法二、以猪胰为原料
提取、沉淀锗胰制成丙酮粉后，加入乙酸（0.02mol/L）约猪胰丙酮粉量的20倍，在100C下，不断搅拌，提取12h，提取完毕后，离心，滤渣加10倍量乙醇（0.02mol/L）继续提取6h，合并两次滤液，在每100ml加冷丙酮33ml（体积分数为33%），过滤。滤液补加冷丙酮至体积分数为70%，静置4h，离心，分离沉淀物，用丙酮、乙醚脱脂脱水，真空干燥，得沉淀物。
猪胰丙酮粉HAc;100→_提取滤液丙酮；乙醚→_沉淀沉淀物
分级沉淀在沉淀物加入50倍沉淀物量的冷氯化钠（2g/L即0.2%）,用氨水调pH为8，搅拌溶解，待溶解完全后，纸浆过滤，得清澈的滤液，将滤液冷却至2～30C,在每100ml滤液中加入冷丙酮40ml，使体积分数达40%，低温冷藏，过夜。离心，分离上清液补加冷丙酮至体积分数为60%，静置4h，低温冷藏，沉淀用丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，即得粗制品。
沉淀物 NaCl;氨水；丙酮→_分级沉淀粗制品
吸附、洗脱、透析、冻干取粗制品溶于一定量的pH4.5乙酸缓冲液（0.001mol/L）中，离心，分离上清液，上清液加入弱酸性阳离子交换树脂AmheriteCG-50,m(树脂)：m（粗制品）=50：1，在搅拌下，使之吸附2h，收集树脂，用pH4.5乙酸缓冲液（0.001mol/L）漂洗树脂直至无泡沫。用2倍量pH5的氯化钠（1mol/L）溶液搅拌洗脱树脂1h，分离树脂，洗脱液透析脱盐，冷冻干燥，即得精致品胰激肽释放酶。
粗制品醋酸缓冲液：Amberlite CG-50;Ph4.5→_吸附吸附物醋酸缓冲液；ＮaCl→_洗脱
洗脱液透析；冻干→精制品}

酶活力100U/mg。

胰激肽原酶白色或微黄色粉末，有特殊的气味，易溶于水，不溶于乙醚；对热、酸，碱、氧化剂均不稳定。最早从哺乳动物胰腺中提取的一种蛋白水解酶，是在激肽体系当中重要的一个环节，胰激肽原酶在组成上是由4种糖与18种氨基酸所组成的。其外观呈白色粉末状，无臭，能够在水中溶解。在临床当中胰激肽原酶在临床上能够起到促进血液循环，促进血管扩张的作用，被广泛的运用在心血管疾病当中。

胰激肽原酶是人体组织和哺乳动物中的一种激肽释放酶，在体内以无活性的前体一激肽释放酶原形式存在，能使激肽原降解成激肽。激肽能扩张血管和毛细血管，增加血管通透性，改善微循环，起调节血压等作用，此外还能降低心肌耗氧量。此酶也是一种活化因子，能把纤溶酶原激活成纤溶酶，把不溶性的纤维蛋白水解成可溶性小肽，从而导致血栓溶解，但此作用比尿激酶缓慢。还可调节和降低高血压。口服吸收较迅速，t1/2约7小时，经肾排泄。