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发布人：上海彩佑实业有限公司
发布日期:2024/4/22 11:17:54
上海雅吉生物科技有限公司 内部资料
CCK8 检测耐药细胞株耐药株 PC9R 吉非替尼药物的耐药作用
细胞： PC9R 、PC9
药物：吉非替尼
仪器与试剂： CCK8 试剂 日本同仁；
分光光度计 TECAN
实验过程：
一：细胞培养
PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%双抗(青链霉素混合液) 的 DMEM 培养基，置于 37℃， 5% CO2 的培养箱中进行培养。显微镜下观察细胞状态。
二、 吉非替尼药物贮藏液的配置
向已称好样本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀释成 50mmol/L 的浓度，使 用前再稀释弄所需的使用浓度。
三、 CCK8 试验
1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的细胞悬液(2000–3000 cells/孔)。将培养板在培养 箱预培养 24 小时 ( 在 37℃， 5% CO2 的条件下 )。
2. 向培养板加入 10 ul 八个浓度 (0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM) 的待测药物。
3. 将培养板在培养箱孵育 24 小时。
4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O. D 值 的读数，斜着培养板壁加， 不要插到培养基液面下加) 。加入后轻轻振摇培养板。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
上海雅吉生物科技有限公司
内部资料
四、 IC50 结果计算
1、仪器导出原始数据
吸光度检测
通道
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
检测波长
A
450 nm
B
1.001
0.881
0.915
0.686
1.951
1.422
1.315
1.314
1.209
2.044
C
1.226
1.254
1.166
0.581
2.273
1.503
1.478
1.508
1.112
1.973
检测日期
D
1.57
1.544
1.543
0.522
1.929
1.661
1.803
1.743
1.143
2.145
2019/8/1
E
1.691
1.787
1.717
0.487
0.239
1.943
1.858
1.796
0.93
0.232
F
1.811
1.769
1.838
0.399
0.234
1.941
1.859
1.896
0.857
0.244
检测时间
G
2.094
1.838
1.905
0.525
0.25
2.077
1.903
1.963
0.851
0.232
16:07:31
H
加样备注：
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
A
PCR
PC9R
B
12.5uM
12.5uM
12.5uM
25uM
0uM
12.5uM
12.5uM
12.5uM
25uM
0uM
C
6.25uM
6.25uM
6.25uM
25uM
0uM
6.25uM
6.25uM
6.25uM
25uM
0uM
D
3.125uM
3.125uM
3.125uM
25uM
0uM
3.125uM
3.125uM
3.125uM
25uM
0uM
E
1.5625uM
1.5625uM
1.5625uM
50uM
空白
1.5625uM
1.5625uM
1.5625uM
50uM
空白
F
0.78125uM
0.78125uM
0.78125uM
50uM
空白
0.78125uM
0.78125uM
0.78125uM
50uM
空白
G
0.390625uM
0.390625uM
0.390625uM
50uM
空白
0.390625uM
0.390625uM
0.390625uM
50uM
空白
H
2、计算结果
亲本株
浓度(uM)
50
25
12.5
6.25
3.125
1.5625
0.78125
0.390625
抑制百分比
(%)
87.32965
80.36832
61.80479
46.16943
27.55064
17.64273
13.53591
5.819521
耐药株
浓度(uM)
50
25
12.5
6.25
3.125
1.5625
0.78125
0.390625
抑制百分比
(%)
64.61313
49.46828
38.70554
30.67473
17.51008
10.35937
8.544188
4.015402
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