PKM2抗体的应用

背景^[1-3]

PKM2抗体是一种非偶联、分子量约58kDa、兔源、抗PKM2多克隆抗体。它主要用于人、小鼠、大鼠、猴子背景下的WB实验，且不带标记。编码的蛋白质是一种丙酮酸激酶，可催化磷酸基团从磷酸烯醇丙酮酸转移到ADP，生成ATP和丙酮酸。

PKM2在肿瘤代谢和癌症细胞增殖中具有重要作用。在多种肿瘤中，如乳腺癌、肺癌等，PKM2表达水平较高，且与肿瘤的预后具有显著相关性。过表达PKM2能够显著增加乳腺癌和肺癌中Hsp90α的分泌，促进肿瘤细胞的增殖和迁移能力。同时，PKM2的调控与肿瘤的代谢重编程密切相关，影响肿瘤的发展和治疗反应。

PKM2抗体

因此，PKM2抗体在癌症研究和代谢研究中非常重要。它可以用于研究PKM2在不同类型的癌症中的表达水平，作为潜在的生物标志物；在肿瘤组织中定位PKM2，帮助诊断和分型；以及通过流式细胞术分析细胞群体中PKM的表达和活性。

PKM2是一种在细胞代谢中起重要作用的酶，特别是在糖酵解过程中。它参与将葡萄糖转化为能量的过程，并在肿瘤细胞中高表达。

PKM2抗体通常用于研究肿瘤细胞的代谢特性和治疗策略。通过检测PKM2的表达水平，可以评估肿瘤细胞的代谢活性和增殖能力。此外，PKM2抗体还可以用于检测肿瘤组织中的PKM2表达水平，以确定肿瘤的类型和分级。

应用^[4][5]

PKM2抗体可以用于SIRT1调控PKM2去乙酰化抑制蛋白稳定性的机制及其在胃癌代谢重编程中的作用

一、PKM2在胃癌(GC)中高表达且与患者的生存期呈负相关首先,本研究采用UALCAN数据库预测PKM2在GC中的转录水平。结果表明,PKM2的mRNA水平在TCGA-STAD组织中较癌旁正常组织显著增加。我们进一步预测了PKM2与TCGA-STAD样本临床病例特征的关系,包括病人性别、年龄、肿瘤分期和等级。结果表明,GC患者肿瘤组织中PKM2的表达水平与肿瘤等级有显著关系。根据PKM2 mRNA表达水平,在GEPIA数据库中采用Kaplan-Meier生存曲线分析高/低PKM2表达是否与GC患者生存率有关。PKM2抗体结果发现,PKM2高表达与较短的无复发生存期(RFS)有关,说明PKM2可能是GC可能的预后标志物。进一步的我们通过检测临床胃癌患者中PKM2的表达发现,PKM2的mRNA和蛋白水平都显著高于正常对照组。

二、PKM2与GC细胞糖代谢和增殖作用的相关性进一步,为研究PKM2的生物学功能,我们检测了PKM2在正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN72)中的表达水平。PKM2抗体结果显示,对比GES-1细胞,PKM2在胃癌细胞系中的表达上调。我们选取了正常GES-1细胞、AGS和SGC7901胃癌细胞进行下一步实验。为了进一步探讨PKM2的功能,我们构建了过表达和敲低载体oe-PKM2和si-PKM2,并转入AGS和SG7901细胞中。CCK-8和克隆形成实验共同分析了PKM2对细胞增殖的影响,Transwell实验PKM2检测了对细胞侵袭迁移的影响。结果显示,PKM2显著促进细胞的增殖,增强细胞侵袭和迁移的能力。为了明确PKM2是否影响肿瘤细胞糖代谢,我们采用相关的试剂盒检测了糖酵解相关指标(ATP产生、葡萄糖摄取和乳酸生成的变化水平,结果表明,PKM2促进了有氧糖酵解的发生。

三、SIRT1去乙酰化PKM2K280位点我们试图研究PKM2乙酰化是否受SIRT1调控。一般而言,PKM2通常在K335赖氨酸和K280赖氨酸位点发生乙酰化修饰。因此,进一步确认乙酰化作用位点,我们构建了K335R和K280R突变质粒,并在PKM2-WT(野生型)、K335R和K280R的细胞中转染SIRT1过表达质粒。通过免疫沉淀和western blot检测PKM2乙酰化水平。PKM2抗体结果显示,SIRT1与PKM2K280R的活性无关。过表达或敲低SIRT1后,利用特异性乙酰化抗体,检测SIRT1对PKM2K280乙酰化水平的影响。我们发现SIRT1显著抑制PKM2 K280的乙酰化修饰。综上所述,SIRT1在PKM2的K280位点处导致去乙酰化。

四、SIRT1介导PKM2乙酰化,进而抑制肿瘤形成最后,建立异种移植小鼠模型,我们分析SIRT1/PKM2是否调控肿瘤形成及生长(n=6/组)。通过慢病毒感染制备SIRT1、PKM2WT、SIRT1+PKM2WT稳定表达的AGS细胞,然后将5×107个AGS细胞皮下注射于雌性裸鼠背部。PKM2抗体结果表明,注射后4周后,所有注射组中的裸鼠均形成肿瘤。与control组相比,PKM2 WT组的裸鼠的肿瘤大小和重量显著增加,且糖酵解水平显著增加。与PKM2 WT组相比,SIRT1+PKM2 WT组显著抑制肿瘤体积,并降低肿瘤重量。此外,SIRT1+PKM2 WT转染的肿瘤组织糖酵解水平显著降低。

参考文献

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[5]张程鹏.SIRT1调控PKM2去乙酰化抑制蛋白稳定性的机制及其在胃癌代谢重编程中的作用[D].南方医科大学,2024.