人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT是一种用于检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清和其他生物液体中白介素2受体（IL-2R）含量的试剂盒。该试剂盒基于双抗体夹心ELISA方法，利用HRP偶联的抗体催化TMB产生颜色物质，并通过标准曲线计算出样品中人白介素2受体的含量。

人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT

人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT可以用于Graves病患者血清IL-3、IL-2、sIL-2R的表达研究

IL-2和IL-2R不仅参与免疫病理过程,而且还影响甲状腺细胞的正常生长、分化等,而甲状腺功能障碍又使其免疫紊乱进一步加重。IL-3具有显著的免疫调节作用,已有研究表明IL-3能促进外周血T细胞的增殖,这种作用主要是它通过增殖T细胞对IL-2的敏感性来实现,长期的培养观察表明IL-3不改变T细胞亚群的比例。在IL-2存在的条件下,它还能促进B细胞的增殖及分化,并能诱导、激活B细胞分泌免疫球蛋白,IL-3的这些作用是通过诱导B细胞表达IL-2R来实现的。IL-2要发挥作用必须与IL-2R结合,血清中SIL-2R与细胞上mIL-2R竞争性与IL-2结合,从而抑制了IL-2的作用。

探讨Graves病患者治疗前后血清IL-3、IL-2、sIL-2R的表达研究。研究对象与方法：37例初诊Graves病的甲状腺机能亢进症患者,在甲亢治疗前后分别抽血并使用人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT检测IL-3、IL-2、sIL-2R,余送作TT4、TT3、FT4、FT3、sTSH、TGA、TPOAb,比较治疗前后IL-3、IL-2、sIL-2R的表达水平。健康对照组37例,进入研究时抽血检测IL-3、IL-2、sIL-2R,余送作TT4、TT3、FT4、FT3、sTSH、TGA、TPOAb水平。

人白介素2受体(IL-2R)ELISA KIT结果：治疗前甲状腺机能亢进患者血清TT4、TT3、FT4、FT3、sTSH、TPOAb、TGAb以及IL-2、IL-3、sIL-2R水平与健康对照组均有显著差别,差异具有统计学意义(P<0.05)。甲状腺功能亢进症患者经治疗后IL-3、IL-2表达显著升高,SIL-2R的表达水平降低,治疗前后IL-3、IL-2、sIL-2R的表达水平分别为370.51±31.40pg/ml、628.11±60.76pg/ml;43.78±6.55pg/ml,62.22±3.28pg/ml;545.68±39.04pmol/L.410.54±28.82pmol/L pg/ml;治疗前后比较,统计有显著差异(P<0.01)。IL-3.IL-2表达与甲状腺激素水平呈负相关,SIL-2R与甲状腺激素水平呈正相关(P<0.05)。

参考文献

[1]Graves’disease and gene polymorphism of TNF-α,IL-2,IL-6,IL-12,and IFN-γ[J].Mehdi Anvari;;Omid Khalilzadeh;;Alireza Esteghamati;;Fatemeh Momen-Heravi;;Mahdi Mahmoudi;;Shadi Abdar Esfahani;;Armin Rashidi;;Aliakbar Amirzargar.Endocrine,2010(2)

[2]IL-2 and its high-affinity receptor:Genetic control of immunoregulation and autoimmunity[J].Jinguo Wang;;Linda S.Wicker;;Pere Santamaria.Seminars in Immunology,2009(6)

[3]Cytokine promoter polymorphisms in Taiwanese patients with Graves'disease[J].Ming-Yuh Shiau;;Chien-Ning Huang;;Tzi-Peng Yang;;Yi-Ching Hwang;;Kan-Jen Tsai;;Chieh-Ju Chi;;Yih-Hsin Chang.Clinical Biochemistry,2006(3)

[4]Lymphoid tyrosine phosphatase(PTPN22/LYP)variant and Graves’disease in a Polish population:association and gene dose‐dependent correlation with age of onset[J].AgataSkórka;TomaszBednarczuk;EwaBar‐Andziak;JanuszNauman;RafalPloski.Clinical Endocrinology,2005(6)

[5]寿砚芸.Graves病患者血清IL-3、IL-2、sIL-2R的表达研究[D].浙江大学,2014.