ADAM10抗体的应用

背景^[1-3]

ADAM10抗体是针对ADAM10蛋白的特异性抗体。ADAM10是哺乳动物ADAM家族中的一种金属蛋白酶-去整合素，它在多种生物过程中发挥关键作用，尤其是在切割特定的膜结合分子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、Notch受体及其配体delta的过程中起到重要作用。

ADAM10抗体是一种针对解聚素和金属蛋白酶10(A Disintegrin and Metalloproteinase 10，简称ADAM10)的特异性抗体。ADAM10是一种膜结合的金属蛋白酶，它在多种生理和病理过程中起着关键作用，包括细胞粘附、迁移、分化、信号传导以及蛋白质的切割和释放。

ADAM10能够切割多种蛋白质，如TNF-α（肿瘤坏死因子-α）和E-钙粘蛋白。具体来说，ADAM10在76-ala-|-val-77处将TNF-α的膜结合前体切割成其成熟的可溶形式。此外，ADAM10还负责几种其他细胞表面蛋白的蛋白水解释放，包括ephrin-a2，以及淀粉样前体蛋白的组成型和受调节的α-分泌酶切割。同时，它也参与细胞朊病毒蛋白的正常切割，以及细胞表面粘附分子L1的切割和膜囊泡的释放，这表明ADAM10具有基于囊泡的蛋白酶活性。

ADAM10抗体

在阿尔茨海默病（AD）的发病机制中，ADAM10发挥着特别重要的作用。作为主要的α-分泌酶，ADAM10能够促进淀粉样前体蛋白（APP）的非淀粉样肽代谢途径，减少β-淀粉样蛋白（Aβ）的产生，同时增加具有神经保护作用的sAPPα的产生。sAPPα在神经元可塑性/存活中发挥重要作用，对兴奋性毒性有神经保护作用。

ADAM10抗体的应用非常广泛。这种抗体已被测试并应用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学和蛋白质印迹等多种实验方法，以识别和研究ADAM10的表达和定位。通过使用这种抗体，研究人员可以更深入地了解ADAM10在生物体中的作用，从而推动相关领域的研究进展。

应用^[4][5]

ADAM10抗体可以用于Kenpaullone通过SHMT2促进ADAM10翻译并改善阿尔茨海默病的病理

KEN通过ADAM10 5’UTR促进ADAM10的翻译目的:探究小分子药物KEN处理数种细胞后其ADAM10蛋白表达的变化并探究其作用机制。

方法:1.利用ADAM10抗体WB技术,观察药物KEN及其结构类似物Alsterpaullone和同为CDK/GSK3抑制剂的AT7519处理细胞后,其ADAM10蛋白表达的变化。

2. 药物KEN分别处理数种类型的细胞后,利用ADAM10抗体WB技术检测细胞ADAM10蛋白水平的变化。

3. SH-SY5Y细胞经小分子药物KEN的时间梯度和浓度梯度的处理后ADAM10抗体WB技术探究其最合适的作用时间和浓度。

4. SH-SY5Y细胞在适宜浓度和时间的KEN作用下,ADAM10抗体免疫荧光技术检测其与对照组相比的ADAM10蛋白表达强度。

5. CCK-8试剂盒检测不同浓度的KEN对SH-SY5Y细胞活性的影响。

6. WB技术探究KEN对SHSY5Y-APP细胞APP蛋白及分泌型蛋白s APPα表达的作用。

7. ELISA实验探究SHSY5Y-APP细胞在KEN处理后,其分泌的细胞外Aβ1-42在处理组和对照组之间的差异。

8. 使用q-PCR技术探究KEN对SH-SY5Y细胞的m RNA表达是否有影响。

9. 使用转录抑制剂Act D、翻译抑制剂CHX、蛋白酶体抑制剂MG132、溶酶体抑制剂CQ和翻译起始因子复合物竞争性抑制剂4EGI-1作用于细胞,ADAM10抗体WB技术观察其是否能阻断KEN对ADAM10的表达促进作用。

10. 将CDK5和GSK3β的si RNA转染到细胞中,ADAM10抗体WB技术观察其是否能阻断KEN对ADAM10的表达促进作用。

11. 将包含或不包含5’UTR片段的ADAM10质粒转染到细胞中,WB技术观察KEN的有效作用片段。

12. 将包含有ADAM10启动子和5’UTR片段的序列克隆到PGL4.17的荧光素酶报告基因质粒中,然后将各个片段的质粒转染到细胞中,与对照组(Ctrl)相比,观察各处理组的荧光素强度。

结果:1.SH-SY5Y细胞在不同浓度的三种试剂(KEN、Alsterpaullone、AT7519)作用下,只有KEN与对照组相比明显增加了细胞ADAM10蛋白的表达(**P<0.01)。2.SH-SY5Y细胞在KEN的时间梯度(0-48小时)作用下,处理36小时的条件下细胞ADAM10蛋白表达增加最明显(**P<0.01)。

3.人源性的HEK-293细胞、小鼠的传代海马神经元HT22、小鼠的原代神经元在不同浓度(0-2.0μM)的KEN作用下,细胞的ADAM10蛋白表达增加(**P<0.01)。

4.ADAM10抗体免疫荧光观察到的结果同WB:SH-SY5Y细胞在恰当的时间和浓度的KEN作用下ADAM10蛋白表达增加(**P<0.01)。

5.不同浓度的KEN(0-2.0μM)对细胞活性的影响无统计学意义。

6.SHSY5Y-APP细胞在750 n M的KEN作用36小时后与对照组(Ctrl)相比,分泌型蛋白s APPα明显增加(**P<0.01),而APP蛋白表达变化无统计学意义。

7.SHSY5Y-APP细胞在750 n M的KEN作用36小时后与对照组(Ctrl)相比,其分泌的Aβ1-42明显减少(*P<0.05)。

8.SH-SY5Y细胞在750 n M的KEN作用36小时后,其ADAM10m RNA水平和对照组相比无明显变化(P>0.05)。

9.有效浓度的翻译抑制剂CHX和翻译起始因子复合物竞争性抑制剂4EGI-1作用于细胞后,可以阻断KEN对ADAM10的蛋白表达促进作用。

10.敲低CDK5和GSK3β后,不影响KEN对细胞ADAM10的蛋白表达促进作用。11.KEN促进包含5’UTR片段细胞的ADAM10蛋白表达(**P<0.01),而对不含有5’UTR片段的细胞没有影响。

结论:1.KEN可以促进多种细胞的ADAM10蛋白表达。2.SH-SY5Y细胞在750 n M的KEN作用36小时的条件下,ADAM10蛋白增加最明显。3.有效浓度的KEN对细胞活性几乎无影响。4.SH-SY5Y细胞在750 n M的KEN作用36小时后,ADAM10抗体WB检测其培养基中的分泌型蛋白s APPα明显增加。5.KEN在转录后水平以依赖5’UTR的方式对ADAM10的蛋白表达进行调控。

参考文献

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