维罗非尼的联合用药研究

发布日期:2024/3/27 9:40:42

研究背景

维罗非尼(PLX4032)是由罗氏公司开发的一种激酶抑制剂，用于治疗转移性或不可切除黑色素瘤。黑色素瘤通过BRAF V600突变使BRAF蛋白恒定激活，导致细胞无限增殖和生长，以及侵袭其他组织。该物质的作用机制便是通过抑制BRAF蛋白（RAS-RAF-MEK-ERK信号通路的组成部分）的活性来实现靶向治疗，从而抑制黑色素瘤的生长和扩散。临床试验表明，维罗非尼在治疗BRAF V600突变阳性的黑色素瘤患者中具有显著的疗效。研究显示，与传统的化疗方案相比，维罗非尼能够显著延长患者的无进展生存期和总生存期。研究还发现，该药物可改善患者的生活质量，并减轻症状，如疼痛和疲劳。

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尽管维罗非尼在治疗黑色素瘤中取得了很大的成功，但它也存在一些副作用。最常见的副作用是皮肤相关反应，如皮疹、干燥、瘙痒和日光过敏。这可能会对患者的生活造成一定的困扰，但通常是可控制的。此外，维罗非尼还可能导致发热、恶心、呕吐、关节痛和头痛等不良反应。在一些罕见的情况下，维罗非尼可能会引起更严重的副作用，如心脏问题、肝脏损害和视觉障碍。因此，在使用维罗非尼之前，医生必须对患者进行全面评估，并定期进行监测。

联合用药研究

（一）维罗非尼联合西妥昔单抗对BRAF突变型和野生型结直肠癌细胞株的作用

应用MTT法检测，将不同浓度西妥昔单抗，维罗非尼单药以及两药联合分别作用于BRAF突变型结直肠癌细胞株RKO，HT-29和BRAF野生型结直肠癌细胞株DIFI，CACO-2后，观察各细胞株增殖变化。通过集落形成实验,，经过长时间培养细胞验证不同处理因素对细胞增殖的抑制作用。Western blot实验检测EGFR下游通路靶蛋白的活性在两药联合后是否出现明显下调。

结果显示，单药治疗，西妥昔单抗能一定程度抑制BRAF野生型结直肠癌细胞株增殖，抑制率达26%~40%，而BRAF突变组两种细胞株对西妥昔单抗均耐药。维罗非尼对不同基因状态细胞的增殖均有一定的抑制作用，IC50均小于7μmol/mL，其中BRAF突变细胞更为敏感。对比单药西妥昔单抗，联合维罗非尼后更加明显地抑制了细胞增殖，4种细胞存活率均明显降低(P＜0.05)。长时间集落形成实验证实两药联合形成集落的面积和数量均明显减少。Western Blot实验显示对比单药，两药联合明显下调了p-EGFR，BRAF，p-ERK的表达。也就是说，BRAF抑制剂维罗非尼无论在BRAF突变型还是野生型结直肠癌细胞株中，均能增强西妥昔单抗作用的敏感性[1]。

（二）维罗非尼（VEM）联合西达苯胺(CDM)对继发性急性髓系白血病(secondary acute myeloid leukemia,sAML)细胞衰老的影响。

以sAML细胞系为研究对象(n=3)，实验分为对照组，VEM单药组，CDM单药组，VEM+CDM组。CCK-8实验检测sAML细胞增殖抑制率，免疫荧光技术检测sAML细胞衰老发生，流式细胞术检测sAML细胞周期分布及凋亡发生，Swiss Target Predict，TargetNe，SEA及PharmMapper等4个网络药理学数据库预测VEM联合CDM的可能靶点和信号通路，RT-qPCR实验分析及验证VEM联合CDM的可能机制。

结果，VEM以时间剂量依赖性抑制sAML细胞增殖，VEM的半数抑制浓度(IC_(50))在SKM-1和MOLM-13细胞中分别为(24.15±1.18)μmol/L(P<0.0001)和(11.30±0.38)μmol/L(P<0.0001)，VEM(SKM-1:1/3 IC_(50)-VEM，MOLM-13:1/2 IC_(50)-VEM)联合CDM协同抑制sAML细胞增殖(P<0.01)；VEM联合CDM促进sAML细胞衰老相关标志物TRF2和Lamin B1表达；VEM联合CDM可使sAML细胞周期停滞于G_0/G_1期(P<0.05)，并促进sAML细胞凋亡发生(P<0.05)。同时，网络药理学及RT-qPCR实验分析并验证VEM协同CDM通过抑制PI3K-AKT及MAPK信号通路促进sAML肿瘤细胞衰老发生(P<0.05)。也就是说，VEM联合CDM通过下调PI3K-AKT及MAPK信号通路促进sAML细胞衰老发生，抑制sAML细胞增殖及促进sAML细胞凋亡，提示VEM联合CDM方案可能是sAML患者新的治疗方案[2]。

制备方法

文献公开了一种维罗非尼与哌嗪共晶及其制备方法，这种共晶包含摩尔比为1:1的维罗非尼和哌嗪，以Cu Kα射线测得的X射线粉末衍射图谱在衍射角度2theta值为7.6±0.2°，15.2±0.2°，17.3±0.2°，21.5±0.2°，22.2±0.2°处具有特征峰。本发明提供的维罗非尼与哌嗪共晶在引湿性，稳定性，溶解度和口服生物利用度方面具有显著优势。此外，该共晶制备方法工艺简单，结晶过程易于控制，重现性好，适用于工业化生产[3]。