透明质酸酶冻干制剂的制备方法

透明质酸酶是一类能够降解透明质酸的酶的总称。早在1928年Duran-Reynals在研究哺乳动物睾丸及其他组织提取物时发现了一种“扩散因子”，可以促进皮下注射的疫苗、染料、毒素等更好地扩散。1940年Meyer将这种“扩散因子”命名为Hyaluronidase。此后，人们在许多组织及生物体内检测到了透明质酸酶，包括细菌病毒、细菌、真菌等，非脊椎动物如水蛭、甲壳类动物的毒液中也产生透明质酸酶。脊椎动物中，在蛇、蜥蜴的毒液中，睾丸及其他器官如肝脏、肾脏、淋巴系统及皮肤中均发现透明质酸酶的存在。为了保证其稳定性，方便使用，常常使用复杂的酶活保护剂、稳定剂、缓冲剂。本文将介绍一种制备透明质酸酶冻干制剂的方法^[1]。

制备步骤

将发酵液上清与透明质酸钠(分子量为8000Da)配制含有透明质酸酶的料液，使用纯化水定容至1L。其中，1L料液中的透明质酸酶含量为1.4×107IU，透明质酸钠的含量为5g。将配制的料液分装于500ml玻璃瓶中，装液量为200ml/瓶。将玻璃瓶置于冷冻干燥机，设置如下冷冻程序：-18℃～-20℃环境下预冻24h，在-35℃～-40℃环境下预冻48h，在-15℃～-40℃，10～20mbar环境下干燥48h，得到透明质酸酶冻干制剂。

优势

此发明具有以下优点：本配方创新性的采用透明质酸盐作为透明质酸酶的酶活保护剂及分散剂，在生产低分子及寡聚透明质酸的过程中，不会引入额外的杂质。在不存在表面活性剂、缓冲剂的情况下，该透明质酸酶冻干制剂可实现高的酶活回收率，高酶活稳定性。透明质酸酶冻干制剂的制备方法适应面广，无论是发酵液上清或是经过不同方法纯化的酶液均可以采用该方法进行冷冻干燥。

参考文献

[1] 一种透明质酸酶冻干制剂及其制备方法. [P] CN114250212A