新藤黄酸的药理作用

背景及概述^[1][2]

藤黄(Gamboge)系藤黄科植物藤黄(GarciniahanburyiHook.f.)所分泌出的干燥树脂，呈红黄色或橙红色，圆柱形或不规则的块状物，质脆易碎，主要产于柬埔寨、泰国、越南，是我国传统进口南药。其性寒，味酸、辛、涩，有毒，具破血散结、解毒、止血、杀虫之功效，用于治疗瘰疬、痈疽、疖肿等顽疾、近年来，其抗肿瘤作用逐渐受到高度关注，研究证实，藤黄中的藤黄酸(Gambogicacid)、新藤黄酸(Neogambogicacid，NGA)为藤黄抗肿瘤作用的有效成分，具有抗瘤谱广，毒性较低的特点。其中新藤黄酸的抗肿瘤活性约为藤黄酸的2 倍，抗肿瘤作用尤为显著，有希望成为新结构类型的抗肿瘤药物，迄今已有较多其提取、分离、药理研究报道。

制备 ^[1][2]

在藤黄中，新藤黄酸的含量可达到8.01% ～ 37.8%，因此如何优化其提取分离工艺具有实际意义。

1)采用正交试验法优选新藤黄酸的提取工艺为：以4 倍量丙酮提取3 次，每次2h。确定了DM130 大孔吸附树脂吸附纯化新藤黄酸的条件是：上样量与树脂之比为1∶6，径高比为1∶10，收集洗脱液量为柱体积倍数的15 倍，洗脱流速控制在2BV/h。确定硅胶柱分离纯化新藤黄酸的工艺参数为：硅胶装柱，流动相采用丙酮-醋酸乙酯的不同比例进行梯度洗脱，并取样追踪TLC检测，收集丙酮-醋酸乙酯(10∶1)洗脱部分，减压回收溶剂至干，用0.5% NaOH溶液溶解，过滤，滤液用2mol/L的盐酸酸化，析出亮黄色沉淀，过滤，纯化水洗至中性，沉淀低温减压干燥，得亮黄色粉末固体，即新藤黄酸。

2)采用正交试验法进一步优选新藤黄酸的提取工艺。结果显示，溶剂的浓度对提取量有显著影响，其次的影响因素为提取时间、提取次数、溶剂的量。确定提取新藤黄酸的工艺为：12 倍量的甲醇，提取3 次，3h/次。研究结果则显示新藤黄酸的醇提条件为先以甲醇(pH=7)常温浸提，时间为20 min，再回流提取5 h，共2次。认为醇提的次数对新藤黄酸的提取影响。

3)通过HPLC定量分析新藤黄酸，比较了7种不同大孔树脂对新藤黄酸的吸附性能，对大孔树脂分离纯化新藤黄酸的工艺进行筛选。结果显示，AB-8树脂对分离新藤黄酸的吸附性能适中，可将其含量由浸膏中的16.3%提高至67.0%。据此认为AB-8树脂吸附新藤黄酸的纯化方法可取，具有一定的应用前景。

药理作用^[1][2]

研究发现，新藤黄酸（NGA）对多种肿瘤都具有很好的治疗效果。

1）肺癌

研究结果表明，NGA 是在体外将细胞于G0 /G1 期阻滞，并通过p38 细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK) 信号通路p38 MAPK 通路，而引起肺腺癌A549 细胞的凋亡。在裸鼠种植瘤上更进一步证明NGA 的抗肿瘤效应。NGA 能够通过抑制G0 /G1 期和体外下调cyclin D1和环氧化酶( COX) -2 的表达来诱导肺A549 细胞的凋亡。此外，在体内实验中，同样也证明了NGA 能够治疗A549 裸鼠移植瘤。研究发现，NGA 在A549 和细胞中可以诱导自噬空泡形成，这种自噬效应是通过激活p53、Bax 和Caspase-3，抑制Bcl-2 等途径从而促进肿瘤细胞的凋亡。在移植瘤模型中同样获得了类似的实验结果。此外，NGA 还被证实和5-氟尿嘧啶( 5-FU) 对肺腺癌A549 细胞具有协同抑制作用，这是通过上调Caspase-3、Caspase-9、Bax、ＲIP1，下调凋亡诱导因子( apoptosis inducing factor，AIF) 、电压依赖性阴离子通道( voltage dependent anionchannel，VDAC) 、细胞色素C 和Bcl-2 蛋白的表达而起作用的。

2）肝癌

NGA 同样也被证实其能显著抑制肝癌细胞HepG2 的增殖并诱导其凋亡。研究表明，在使用NGA 处理后，HepG2 细胞中磷酸化p38及其下游磷酸化EＲK1 /2 的表达水平增加。NGA 是通过诱导线粒体的氧化应激并激活caspase 蛋白而发挥作用的。

3）乳腺癌
多项实验结果表明，NGA 对乳腺癌有着很强的杀伤作用。研究表明，NGA 对乳腺癌MCF-7细胞的抗增殖效应主要是将其阻滞于G0 /G1 期，使得Fas、FasL 和细胞色素C 通路的活化增加而促进凋亡。对乳腺癌MDA-MB-231 细胞，采用裸鼠模型检测新藤黄酸对其的影响，结果发现新藤黄酸在体内能够抑制乳腺癌的生长，并增加Fas、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 和Bax 的表达，以及降低抗凋亡蛋白Bcl-2 的水平，这主要是通过死亡受体和线粒体途径实现的。在

4）宫颈癌

NGA 可以通过诱导自噬空泡形成而促进宫颈癌HeLa 细胞的凋亡，通过激活p53，减少Bax 和Caspase-3 蛋白表达而起作用的。研制了新型的叶酸靶向的磁性纳米粒包载新藤黄酸，并研究其对宫颈癌Hela 细胞的疗效，纳米粒包载NGA 具有更强的杀伤肿瘤的效果，因此，对于叶酸受体阳性的肿瘤将来可以尝试用此种方法更好地杀灭肿瘤。

5）鼻咽癌N

GA 介导的鼻咽癌CNE-1 细胞凋亡，研究表明，主要是通过线粒体氧化应激、细胞色素C的释放起作用。此外，NGA 可导致磷酸化的AKT 表达浓度和时间依赖性降低，Bcl-2 家族包括Bcl-2、Bax、Bad 在mＲNA 的表达水平也会相应减少。

6）其他

NGA 对人胃癌MGC-803 细胞生长的影响主要是通过诱导线粒体依赖性凋亡和增加p53 的表达而发挥作用的。NGA 对恶性黑素瘤B16 细胞的生长和增殖同样具有抑制作用。

应用^[1][2]

由于研究显示新藤黄酸有较好的抗肿瘤作用，在原药材中含量较高，提取工艺简单，成本低廉，具有明显的开发研究价值，因此，新藤黄酸制剂研究已经受到重视。目前，已有新藤黄酸冻干粉针剂、脂质体冻干粉、亲水凝胶骨架缓释片等剂型得到不同程度的研究。

在新藤黄酸冻干粉针的制剂工艺研究中，通过比较不同支架剂对新藤黄酸冻干粉针剂质量的影响，结果显示以甘露醇100 mg/ml为支架剂比较理想;通过对制剂处方设计进行研究，观察成品的溶解性、冻干效果、pH值以及新藤黄酸的含量变化，确定新藤黄酸0.3 g，胱氨酸1.5 g，甘露醇3.0 g，水加至30 ml为处方。最终确定的制剂工艺(100 支的量)为:在无菌的操作室中称取胱氨酸1.5g、甘露醇30 g置于已灭菌的容器中，再加灭菌注射用水300 ml使溶解，搅拌均匀。在70℃加热及搅拌条件下加0.1%活性炭(w/v)，并保温搅拌10 min，砂芯滤器粗滤脱炭。精密称取新藤黄酸原料3 g，加入NaHCO3 -Na2CO3 缓冲液调pH=7 ～ 8 后加配制量的0.01%的767型针用活性炭，搅拌30 min后，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液检查澄明度、pH值，合格后再经0.22 μm微孔滤器终端过滤后分装于7ml的西林瓶中，每瓶3 ml，低温下冷冻干燥36 h后，在无菌的条件下加盖胶塞、铝盖、封口，包装即得。

采用正交设计法，以崩解时间、缓释效果和pH值为指标综合评价筛选处方，用高效液相色谱法测定制剂的含量，确定新藤黄酸亲水凝胶骨架缓释片处方为羟丙甲基纤维素K15M、乙基纤维素、乳糖的用量分别占片重的30%、6%、15%，并用高效液相色谱法测定新藤黄酸含量，结果显示在5.0 ～ 25.0 μg/ml，线性良好。以羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料，考察羟丙甲基纤维素(HPMC)用量、乙基纤维素(EC)用量、乳糖用量、压片压力和桨转速对药物体外释药行为的影响。结果显示HPMC和EC用量显著影响新藤黄酸的释药速率，乳糖用量、压片压力和桨转速的影响较小。认为可通过调节HPMC和EC用量获得具有理想释药行为的新藤黄酸亲水凝胶缓释片。

采用薄膜-超声法结合冷冻干燥法制备新藤黄酸脂质体冻干粉，以冷冻超速离心-高效液相色谱法测定包封率。电镜下观察到所制备的脂质体形态规整，结果显示，脂质体的平均粒径为128.30 nm，包封率为83.74%。认为此法可制备包封率较高的新藤黄酸冻干脂质体。

主要参考资料

[1] 新藤黄酸的抗肿瘤作用研究进展

[2] 新藤黄酸的研究进展