R2A液体培养基图片的应用

背景^[1-3]

R2A液体培养基用于饮用水中细菌的培养，成分(g/L)：胰蛋白胨：0.25；酸水解酪蛋白；0.5；酵母浸粉：0.5；可溶性淀粉：0.5；磷酸氢二钾：0.3；硫酸镁：0.1；丙酮酸钠：0.3；蛋白胨：0.25；葡萄糖：0.5；pH值7.2±0.2 25℃。

用法：称取本品3.2g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。

R2A液体培养基

纯化水采用的R2A培养基原理如下：

1、R2A培养基可以修复被氯气损伤的细菌，支持耐受氯气的微生物的生长。

2、R2A培养基中的酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖、为可发酵糖类;可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质;

3、R2A培养基中的丙酮酸钠可增强细菌的复苏。

4、R2A培养基中的磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，无水硫酸镁提供二价阳离子，琼脂为凝固剂。

培养基为适合生物生长所需要的人工配制的混合物质养料，常指培养微生物或生物细胞组织的养料，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、保藏和酿造、发酵等方面。具体成分根据生物营养需要而不同。

一般含有水、碳水化合物、含氨物质和矿质盐类等。按所用原料不同可分为两类：应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基，应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配成，称为天然培养基。又因加入或不加入赋形剂可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。R2A可用作纯化水的微生物限度检查。

应用^[4][5]

用于大姜根际及内生益生菌的分离筛选与应用研究

姜瘟病是由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的细菌性土传维管束病害,因其侵染机制复杂、传播快等特点,姜瘟病的防治仍很难解决。目前,生物防治是该病防治的研究热点,因此通过益生菌开展生物防治意义重大。

研究以山东莱芜大姜及其根际土壤为材料,对其新鲜块茎和根际土壤的微生物进行分离,通过生防效果评价从中发掘具有应用潜力的菌种资源,进一步开展了大姜根际微生物BJW-1的包埋固定化及定殖能力研究,并初步探讨了增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）对内生菌BJ-1的标记,其主要结果如下:本文通过对山东莱芜大姜新鲜块茎及其根际土壤中微生物的分离,共获得113株,其中根际菌66株,内生菌47株。

采用优化的表面消毒方法分离生姜块茎内生菌,结果显示:生姜块茎中内生菌平均数量为2.86×10~3 cfu/g.fw,以细菌种类最多,放线菌次之、真菌最少。R2A培养基是分离生姜内生菌的培养基,采用R2A培养基、KB培养基、TSA培养基分离生姜内生菌,可达到较好的效果。

探讨了部分菌株对病原真菌的生防潜能,结果表明:11株放线菌,8株芽孢菌有较好的拮抗活性,其中菌株SJW-1、BJW-5、BJ-7对Fusarium spp.36194、Fusarium oxysporum都有抑菌作用,可能是镰孢属（Fusarium）病原菌植物病害的良好生防菌。芽孢杆菌是姜瘟病防治的重要生防资源,通过抑菌圈和盆栽实验方法,从根际土、块茎中筛选到两株防病效果良好的菌株:根际菌BJW-1、内生菌BJ-1,其防病效果分别为66.45%、61.02%。通过形态学、生理生化特性分析及分子生物学鉴定,可以判定根际拮抗菌BJW-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,内生菌BJ-1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。

进一步利用微生物包埋固定化技术包埋根际解淀粉芽孢杆菌BJW-1,以提高其在土壤中的定殖能力,为微生物菌剂的开发提供基础。首先通过包埋存活率与液体培养基增殖能力实验,确定了包埋基料的配比及浓度:海藻酸钠溶液:菌液=1:1,氯化钙3.0%。在液体培养基环境中,包埋颗粒BJW-1的活菌数呈现一种“先增后减”的趋势,检测8天后,包埋颗粒BJW-1的菌活较对照组提高了53.26%。其次,通过复合生物多糖包埋颗粒BJW-1在室内土壤中的定殖能力分析,初步确定了优选复合配方:海藻酸钠溶液:菌液=1:1,氯化钙3%,多孔淀粉1.5%,糖蜜2%,检测跟踪30天,其存活率变化稳定,平均存活率为160%,30天后,BJW-1的存活率为122%,与对照组相比,提高了8.13倍。

最后,通过大田土壤定殖实验,肯定了优选复合配方包埋BJW-1菌剂的定殖能力,与同菌种普通菌剂相比,田间定殖能力有显著提升,最高可提升12.4倍。最后,以内生枯草芽孢杆菌BJ-1为出发菌株,用EGFP标记该菌株,以期研究其在大姜植株内的定殖规律,进一步揭示生物防治机制。

参考文献

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[5]周宁.大姜根际及内生益生菌的分离筛选与应用研究[D].齐鲁工业大学,2017.