小鼠肾小管平滑肌细胞试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠肾小管平滑肌细胞试剂盒适用于分离培养小鼠肾小管平滑肌细胞。体系提供了的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的肾小管平滑肌原代细胞中成纤维细胞的含量。

肾小管的生理功能有三方面，物质的重吸收和排泌功能,如钠、钾、氯、钙等电解质,蛋白质、氨基酸、葡萄糖的吸收和排泌;尿液的浓缩稀释;泌氢和尿液酸化。其中，小鼠肾小管平滑肌细胞呈长梭形，无横纹，细胞核一个，呈长椭圆形或杆状。小鼠肾小管平滑肌细胞传3-5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

小鼠肾小管平滑肌细胞

虽然肾小管平滑肌组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的肾小管平滑肌组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的肾小管平滑肌组织片能使得肾小管平滑肌细胞的一些功能特性发生改变，从而将肾小管平滑肌细胞分离开来。

应用^[4][5]

用于胰岛素抵抗的慢性肾脏病模型脂肪组织细胞因子谱分析研究

利用细胞因子抗体芯片技术对糖尿病和慢性肾脏病诱导的胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）的小鼠模型的脂肪组织进行检测,分析并比较两种模型的差异细胞因子,阐述其中的炎症因子及内皮损伤相关因子在疾病中的作用,以期揭示慢性肾脏病患者胰岛素抵抗的发病机制。

方法:1.分别建立慢性肾脏病小鼠模型和糖尿病肾病小鼠模型。通过5/6肾切除手术建立慢性肾脏病小鼠模型,建模12周后根据IPGTT和ITT实验,把模型小鼠分为慢性肾脏病不伴胰岛素抵抗组（CKD-NIR组）和慢性肾脏病伴胰岛素抵抗组（CKDIR组）,检测各项生化指标及肾病病理,构建慢性肾脏病模型。同时普通饮食喂养db/db小鼠和及对照组db/c小鼠,7个月后取材,留取尿液和血液便于生化指标检测,留取各组小鼠肾脏用于高碘酸-希夫反应（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）染色后观察动物病理变化情况,判定模型是否成功建立。

2. 取上述慢性肾脏病和糖尿病肾病模型的附睾脂肪组织,利用细胞因子抗体芯片进行检测。将所测样本之间代谢物浓度的差异倍数（Fold Change,FC）>1.2且P值<0.05的细胞因子定义为差异表达因子,将差异因子进行GO分析,KEGG Pathway分析,分别探究每种模型中差异因子的作用,并比较两种模型差异因子的异同。

3. 建立糖尿病肾病模型:与db/c组相比,db/db组小鼠的病理表现为肾小管间质纤维化、肾小球肥大、系膜基质细胞增多、基底膜增厚和足细胞足突部分融合,同时还伴有血清胰岛素和HOMA-IR升高。2.与CKD-NIR组小鼠相比,在CKDIR组小鼠脂肪组织中发现30种差异表达蛋白,主要涉及负调节激素分泌,正调控T细胞趋化,正调控白细胞趋化,白细胞粘附或滚动,负调控平滑肌细胞迁移,刺激肝细胞生长因子等生物过程,参与细胞因子间互作,JAK-STAT信号通路,炎症性肠病,美洲锥虫病,肺结核等信号通路。

参考文献

[1]CXCR6 protects from inflammation and fibrosis in NEMO LPC-KO mice[J].Anke Liepelt,Alexander Wehr,Marlene Kohlhepp,Jana C.Mossanen,Karina Kreggenwinkel,Bernd Denecke,Ivan G.Costa,Tom Luedde,Christian Trautwein,Frank Tacke.BBA-Molecular Basis of Disease.2018

[2]A renal-cerebral-peripheral sympathetic reflex mediates insulin resistance in chronic kidney disease[J].Wei Cao,Meng Shi,Liling Wu,Zhichen Yang,Xiaobing Yang,Hongfa Liu,Xin Xu,Youhua Liu,Fan Fan Hou,Christopher S.Wilcox.EBioMedicine.2018

[3]Interleukin-5 suppresses Vascular Endothelial Growth Factor-induced angiogenesis through STAT5 signaling[J].Felicitas Bucher,Jungho Lee,Sanghee Shin,Minseok M.Kim,Yong-Seok Oh,Sanghoon Ha,Hongkai Zhang,Kyungmoo Yea.Cytokine.2018

[4]NADPH oxidase 2（NOX2）:A key target of oxidative stress-mediated platelet activation and thrombosis[J].Eduardo Fuentes,Jonathan M.Gibbins,Lisa M.Holbrook,Iván Palomo.Trends in Cardiovascular Medicine.2018

[5]陈碧霞.胰岛素抵抗的慢性肾脏病模型脂肪组织细胞因子谱分析[D].广东药科大学,2020.