新生和成年大鼠突触体钙调神经磷酸酶底物的定量比较

背景及概述^[1-2]

钙调神经磷酸酶是哺乳动物脑内含量极丰富的唯一依赖Ca²⁺及钙调素的磷蛋白磷酸酶。该酶（calcineurin,CaN）在脑外组织如精子细胞、淋巴细胞及肌肉组织中也有分布,但含量远远低于脑。CaN由18kDCa²⁺结合的调节亚基和61kD钙调素结合的催化亚基组成。除可与Ca²⁺结合外,该酶还可与Mn²⁺,Ni²⁺,Co²⁺等金属离子结合而影响其活性。

免疫组织化学定位表明，它主要分布在大脑纹状体、海马、大脑皮层等区域，在各个脑区CaN的多种同工酶在特定神经元亚群有不同表达，CaN这种区域性表达可能与不同钙调神经磷酸酶底物专一性有关。

新生和成年太鼠突触体钙调神经磷酸酶底物的定量比较^[2]

大鼠Wistar选用新生3天和成年3～6个月，参照文献方法进行大鼠大脑皮层突触体的制备。突触体粗提液加人适量抗体，4℃水浴保温过夜．以封闭CaN活力，作为加抗体组。对照组是匀浆液代替抗体，同时于冰水浴中放置过夜，然后取加抗体组和对照组脑蛋白粗提液分别与等体积磷酸化反应缓冲液混合，于30℃进行5min体外磷酸化反应。将突触体内磷蛋白标记放射性同位素P，经双向电泳分离，放射自显影。由于加抗体组内CaN没有活力，对照组内CaN有活力，故在相同活力激酶催化下，加抗体组CaN内源底物标记P比对照组强，比较加抗体组与对照组相应蛋白点在自显影照片中的光密度就可鉴定CaN内源底物。将新生和成年大鼠电泳放射自显影X光片用MTV1881CCD型计算机图象处理系统扫描后，用电脑2D软件对均表达的CaN底物蛋白进行定量比较。在PND3时呈高表达的67～73kD、62kD、57kD和50kD底物蛋白与文献报道进行对比推测可能是Neuromodulin(GAP43．p57，B50)．它是一种能与CaN结合的神经膜蛋白．在神经生长和发育中有重要作用。对它们进行定量分析表明，67～73kD、57kD底物蛋白表达水平到成年时下降，50kD蛋白在成年时未检测到，说明这些底物蛋白在突触大量形成时期一定发挥了特殊的作用。而62kD底物蛋白在成年时呈突出的高表达，暗示它在成年突触体中的重要作用。对大鼠大脑皮层突触体粗提液中CaN内源底物同王春华等在大鼠全脑粗提液中所报道的CaN内源底物进行比较发现，98kD、73kD、57kD、34kD和17kD蛋自在全脑和突触体中均被检测到,在突触体中高表达的62kD和87kD却未检测到，说明CaN分布的区域性体现在依赖Ca²⁺的磷酸化作用中。

参考文献

[1]孟祥兵,魏群.小鼠脑内钙调神经磷酸酶内源底物的研究[J].科学通报,1994(11):1046-1049.

[2]阎力君,魏群.大鼠突触体钙调神经磷酸酶内源底物的研究[J].生物化学与生物物理学报,1997(05):91-94.