膜蛋白、核蛋白和胞质蛋白抽提试剂盒的特点

概述^[1] 

膜蛋白、核蛋白和胞质蛋白抽提试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取膜蛋白，核蛋白和胞质蛋白，提取制备过程简便。制备的膜蛋白，核蛋 白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(Gel Shift Assay)、 免疫共沉淀、Western Blotting和酶活性测定等后续蛋白质研究，可以用于培养细胞或动物组织中蛋白质的提取。

特点^[1] 

1. 提取的蛋白限度地保持活性，可以用于Pull Down, EMSA, IP, Enzyme Activity Assay 等实验。

2. 内含有的蛋白酶和磷酸酶抑制试剂可以避免蛋白质的酶解和蛋白质磷酸化状况被破坏。

3. 整个实验过程只需要一个小时左右。无需要超速离心，可以并行处理多个样本。

4. 既可以用于培养细胞（50x107个） ，有可以用于动物组织（50×200 mg）蛋白质的提取。

运输和保存条件^[1] 

常温下运输，收到后将溶液B 2~8°C保存，DTT，溶液A, C 和蛋白酶抑制剂，PMSF 和磷酸酶抑制剂在-20°C的环境中 保存，保质期两年。

试剂盒组成

操作步骤^[1]

1. 对于悬浮培养的细胞，取培养细胞5×106~1×107个，弃去培养液，细胞用预冷的一倍PBS 洗涤两遍；

2. 如果是组织样本，将200 mg 组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS洗涤两次后，4°C离心700 g (3000 rpm)，3 min， 弃上清；

3. 将以上收集的细胞或组织中加入1000 μL预冷的溶液A（使用前每1 mL溶液A 加入1 μL DTT，10 μL PMSF，1 μL蛋白 酶抑制剂和5 μL磷酸酶抑制剂） ，置玻璃匀浆器冰上均质30~50次，或 超声破碎细胞，每次30 sec， 3~4次，每次间隔1 min， 置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％。

主要参考文献

[1] 李焕榕；三种核蛋白提取方法应用于双向电泳的比较。《浙江大学》