R-阿普斯特的主要制备方法

背景及概述^[1]

阿普斯特是消旋化合物，是优化结构中活性最强的化合物，分子中含有1个手性中心，而且该手性碳相连的氢原子不是酸性氢，不会经互变异构而转变构型，因此可将对映异构体拆分为稳定的光活体。实验表明，S-阿普斯特(17)对PDE4和TNF-α的抑制活性强于R-阿普斯特5倍以上，IC50分别为0.074和0.077μmol·L−1。动物实验表明，S-异构体17具有良好的药代动力学性质，对雌性大鼠的口服生物利用度F=64%，半衰期t1/2=5h，且具有中等程度的分布容积和低清除率，对多种CYP氧化酶无抑制作用，血浆蛋白结合率90%。大鼠体内药效学实验表明具有较高的抗炎活性:用脂多糖诱导TNF-α生成的抑制作用的ED50=0.03mg·kg−1；脂多糖诱导嗜中性细胞的抑制作用ED50=0.3mg·kg−1。阿普斯特是口服治疗银屑病型关节炎的有效药物，于2014年经美国FDA批准上市。R-阿普斯特为其异构体杂质。

制备^[1]

R-阿普斯特制备如下：

(1)在2L的反应瓶中加入化合物(I)(25g，129mmol)、溴化铜(58g，260mmol)、500ml乙酸乙酯和250ml二氯甲烷，30℃反应15h，TCL点板确认反应基本进行完全后，停止反应。反应液过滤，蒸除溶剂，残留物加入50ml二氯甲烷溶解，滤去不溶物，浓缩得化合物(II)粗品26.5g(80％)。

(2)将1L的反应瓶中加入化合物(II)(22g，80mmol)、甲烷亚磺酸钠(16.4g，160mmol)和600ml无水乙醇，回流反应10h。TCL点板确认反应基本进行完全后，停止反应。蒸除溶剂，残留物加入水和乙酸乙酯200ml，搅拌后分液，乙酸乙酯(50*2)萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸除溶剂，得到浅黄色固体化合物(III)21.2g(83％)。

(3)在100ml三口瓶中将化合物(III)(2.7g，10mmol)和R-叔丁基亚磺酰胺(3.6g，30mmol)投入三口瓶中，氮气保护下加入60mlTHF，60℃加热溶解。溶解后吸取钛酸四乙酯(9.2ml，45mmol)注入瓶中，维持60℃反应8h。TCL点板确认反应基本进行完全后，停止反应。加入2％氯化钠水溶液60ml，悬浊液过滤，蒸去溶剂，残渣用乙酸乙酯萃取，白色沉淀用EA洗涤，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得到黄色化合物(IVa)2.9g(77％)。

(4)在100ml反应瓶中加入化合物(IVa)(2g，5mmol)，加入THF(40ml)溶解，称取硼氢化钠(1.9g，50mmol)，室温搅拌4h。TCL点板确认反应进行完全后，停止反应。滤液加入甲醇淬灭反应，加入等体积冰6NHCl溶液中，搅拌30min，加2N的氢氧化钠调pH>10，反应液用乙酸乙酯萃取，洗涤、浓缩得化合物(Va)粗品，重结晶得白色固体化合物(Va)1.2g(88％，ee99％)。

(5)将50ml反应瓶中加入化合物(Va)(1g，2.8mmol)、3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐(1g，4.5mmol)、30ml的醋酸一并投入反应瓶中，搅拌，加热回流，TCL点板确认反应基本进行完全后，停止反应。浓缩溶剂，残留油状物加30mL乙酸乙酯溶解，用水洗，再加饱和碳酸氢钠洗及水洗涤，加无水硫酸钠干燥，浓缩，加乙醇30mL和丙酮20mL重结晶，过滤，用乙醇洗滤饼，60℃干燥产品至恒重，得到白色固体化合物R-阿普斯特2.3g(72％，ee99％)。1HNMR(400MHz，CDCl3-d)δ9.46(s，1H)，8.76(dd，J＝8.5，0.8Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.5，7.3Hz，1H)，7.49(dd，J＝7.3，0.8Hz，1H)，7.16–6.99(m，2H)，6.84(d，J＝8.9Hz，1H)，5.87(dd，J＝10.5，4.3Hz，1H)，4.56(dd，J＝14.3，10.4Hz，1H)，4.11(q，J＝7.0Hz，2H)，3.85(s，2H)，3.72(dd，J＝14.4，4.4Hz，1H)，2.87(s，3H)，2.26(s，3H)，1.47(t，J＝7.0Hz，2H)。

检测^[3]

一种利用蛋白质型手性色谱柱的阿普斯特中R-阿普斯特的检测方法，它包括以下步骤：

a、制备供试品溶液：取待测阿普斯特样品，流动相溶解，过滤或不过滤，制备得到供试品溶液；

b、制备R-阿普斯特的对照品溶液：取R-阿普斯特对照品，流动相溶解，制备得到R-阿普斯特的对照品溶液；

c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：α-酸性糖蛋白手性色谱柱，即用α-酸性糖蛋白键合的硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：甲基叔丁基醚与C1～C4醇类溶剂的混合溶剂；所述C1～C4醇类溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。检测波长：230±10nm，优选的检测波长为230±2nm；

d、根据检测结果计算得到阿普斯特样品中R-阿普斯特的含量。

主要参考资料

[1] 改造沙利度胺而成的新药阿普斯特

[2] CN201510982153.5阿普斯特中对映异构体杂质的检测方法

[3] CN201510982153.5阿普斯特中对映异构体杂质的检测方法