鸦胆子苦醇的应用

概述^[1]

鸦胆子系苦木科鸦胆子属植物(BrnceaJavanieaL.Merr)的种子，Kupchan等报道了由B.antidysenterMil.l中分得对多种动物菌株有显著活性且毒性较低的鸦胆丁(Bruceantin)后，有关活性成分的报道引起了人们极大的关注，进一步研究发现了许多新的具有抗肿瘤活性的苦木内酯类化合物。鸦胆苦醇是一种有效的抑制性药物，它是鸦胆子中的苦木素类三萜化合物，已经证明具有Nrf2抑制作用，可以与多种化疗药产生协同作，从而提高肿瘤的治愈率。其具有抗肿瘤及抗阿米巴原虫活性。

应用^[2-4]

1）鸦胆子苦醇抑制人前列腺癌DU145细胞生长。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测鸦胆子苦醇对不同细胞株的生长抑制情况，以及不同浓度的鸦胆子苦醇对DU145细胞的增殖抑制率；应用Hoechst33258染色法观察鸦胆子苦醇处理DU145细胞后所发生的形态学变化；分别采用PI单染及AnnexinV-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布个凋亡率的变化；以Westernblot测定鸦胆子苦醇对MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果表明：鸦胆子苦醇对人前列腺癌DU145细胞的抑制作用更为显著，并且可以时间和剂量依赖性地抑制人前列腺癌DU145细胞的生长，其半数有效抑制浓度IC50为(0.27±0.04)μmol·L-1；Westernblot检测表明鸦胆子苦醇处理后可使磷酸化的p38和JNK表达增加，使磷酸化的ERK表达降低。因此，鸦胆子苦醇是潜在的抗前列腺癌药物，有必要进一步在动物水平阐明其抗前列腺癌活性。

2）鸦胆子苦醇抑制黑色素瘤生长和增殖。采用细胞活力测定(MTS)不同浓度的鸦胆子苦醇对黑色素瘤A375细胞生长抑制率；应用PI单染及Annexin-V-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率的变化；以DCFA-DA荧光探针标记细胞，分析活性氧簇(ROS)的产生；利用WesternBlot检测Nrf2及Akt通路蛋白表达的影响。结果鸦胆子苦醇对黑色素瘤细胞的生长抑制呈剂量依赖性；鸦胆子苦醇处理A375细胞后，细胞周期阻滞在G1期，S期减少。且鸦胆子苦醇诱导细胞细胞凋亡发生；免疫沉淀检测结果表明鸦胆子苦醇处理移植Nrf2蛋白的表达，使磷酸化Akt表达减少。结论鸦胆子苦醇可抑制细胞增殖，并诱导ROS的生成及细胞凋亡发生。Akt途径的抑制可能是鸦胆子苦醇对A375细胞生长抑制及凋亡诱导的作用机制之一。因此，鸦胆子苦醇可能是潜在的抗黑色素瘤的药物。

3）鸦胆子苦醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。用BRU处理MCF-7细胞。采用CCK-8法和流式细胞术检测MCF-7细胞抑制率和凋亡率，Westernblot检测线粒体凋亡通路和内质网应激(ERS)相关蛋白的表达，利用免疫荧光技术实现Nrf2和p53蛋白定位。结果与对照组比较，BRU显著抑制MCF-7细胞增殖，110nmol/LBRU诱导MCF-7细胞凋亡有时间依赖性。110nmol/LBRU显著降低Nrf2及下游蛋白表达，显著增加GRP78、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Apaf-1、Bax/Bcl-2、CytochromeC、Cleaved-caspase3、p53和p21蛋白的表达(P<0.05，P<0.01，P<0.001)，细胞核Nrf2蛋白含量减少、p53蛋白含量增加。结论BRU通过诱发ERS，抑制Nrf2蛋白表达和核转移，破坏抗氧化作用，诱导MCF-7细胞凋亡。

制备^[5]

一种鸦胆子苦醇的制备方法，包括以下步骤：取脱脂鸦胆子原料10kg，加入10倍量70%甲醇溶液浸泡10小时，提取3次，提取液过滤浓缩至无醇，浓缩液加适量水稀释后加入D101大孔树脂中吸附，先用7倍柱体积20%乙醇溶液洗脱杂质，再用5倍柱体积70%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩至密度1.05，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，浓缩液加适量30%乙醇溶液溶解，加入AB-8大孔树脂中吸附，用20倍柱体积50%乙醇溶液洗脱杂质，再用20倍柱体积60%乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩至无水放置结晶，结晶物滤除用乙酸乙酯溶解重结晶，低温干燥得白色针状结晶鸦胆子苦醇4.5g，经hplc检测，含量96.8%。

主要参考资料

[1] 中药鸦胆子化学成分及药理学研究进展

[2] 鸦胆子苦醇抑制人前列腺癌DU145细胞生长及作用机制

[3] 鸦胆子苦醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

[4] 鸦胆子苦醇抑制黑色素瘤生长和增殖的作用机理研究

[5] CN201310384744.3一种鸦胆子苦醇的制备方法