光甘草素的应用

概述^[1]

光甘草素(Glabrene)属异黄烯类黄酮化合物，光甘草素又名光果甘草素，为豆科植物光甘草根的主要有效成份。光甘草素为淡黄色粉末，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇和乙醚。现代研究显示，光甘草素具有清除超氧离子、抑制酪氨酸酶及类雌激素样作用等多种药理活性。但目前尚未有文献报道光甘草素具有较为突出的抗癌效果。

应用^[3]

取对数生长期HepaRG及Caco2的细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调节细胞浓度为1×105/ml，以9ml/瓶接种至100ml培养瓶内。培养48小时后，分别以1ml/瓶加入光甘草素或0.01％DMSO，继续培养24小时。实验终止时先将培养液离心(2g，10min)，再消化贴壁细胞离心，混合所得细胞沉淀用预冷的PBS洗2遍，用70％乙醇固定。细胞固定24小时后离心，弃去固定液，用PBS洗1遍；细胞沉淀中加入含RNA酶(50mg/ml)的碘化丙啶(PI，50mg/ml)溶液0.5ml，避光、室温放置30min后过300目细胞筛；流式细胞仪(激发波长488nm，吸收波长600nm)检测，用FlowJo10.0软件分析，计算凋亡细胞百分数和各细胞周期百分数。

统计分析：计量资料数据用均数±标准差表示，采用SPSS19.0进行t检验统计分析。P＜0.05为有统计学意义。

实验结果：

1.光甘草素对HepaRG及Caco2细胞凋亡率的影响

如表3所示，阴性对照组细胞无明显凋亡，凋亡率为0.08±0.4％。光甘草素25、50及100μmol/L处理HepaRG细胞在G1期前出现明显凋亡峰，凋亡率分别为4.2±2.7、13.7±2.2和25.4±2.1％；光甘草素25、50及100μmol/L处理Caco2细胞的凋亡率分别为4.4±2.6、11.8±1.9和22.9±2.4％；且光甘草素50及100μmol/L处理的HepaRG及Caco2细胞的凋亡率均明显高于阴性组(P＜0.05)，说明光甘草素可诱导肿瘤细胞凋亡。

2.光甘草素对HepaRG及Caco2细胞周期的影响

如表4所示，HepaRG阴性对照组细胞处于G0/G1、S和G2/M期的细胞分别占56.8、23.7和19.5％；光甘草素50及100μmol/L处理48h后，HepaRG细胞处于G0/G1、S和G2/M期的细胞分别占细胞总数的45.2、34.1和20.7％和9.8、45.2和45.3％。Caco2阴性对照组细胞处于G0/G1、S和G2/M期的细胞分别占54.6、25.1和20.3％；光甘草素50及100μmol/L处理48h后，Caco2细胞处于G0/G1、S和G2/M期的细胞分别占细胞总数的46.3、33.1和21.6％和12.1、45.1和42.8％。由此可见，光甘草素可浓度依赖性地增加HepaRG和Caco2细胞处于G2/M的比例，同时减少G0/G1期细胞的比例。

本研究结果显示，光甘草素25～100μmol/L处理可浓度依赖性地诱导HepaRG及Caco2细胞凋亡，并形成细胞G2/M期阻滞，说明光甘草素抑制HepaRG和Caco2细胞增殖作用可能与其诱导细胞凋亡及G2/M期阻滞有关。

主要参考资料

[1] 王建国, 周忠, 刘海峰, & 王建新. (2004). 甘草的活性成分及其在化妆品中的应用. 日用化学工业, 34(4), 249-251.

[2] 何三民, & 石森林. (2003). Hplc法测定甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量. 中草药, 34(7), 618-619.

[3] 戴小寒, & 邓旭明. (2012). 亚抑菌浓度甘草素对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响及对金黄色葡萄球菌介导的肺上皮细胞的保护作用. 中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议论文集.