42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素

雷帕霉素(Rapamycin)现称为西罗莫司(Sirolimus)，是1975年由Veniza等分离得到的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)所产的大环内脂类抗生素。经过多年的研究雷帕霉素现已被开发成为临床使用的强效免疫抑制剂。 以雷帕霉素为前体，化学修饰合成所得的一些结构新颖衍生物，被发现在免疫抑制、抗癌、抗帕金森氏症与艾滋病等方面上，具有新的治疗作用，其中其合成物Temsirolimus、Everolimus、AP23573已作为抗肿瘤靶向新药物进行临床研究，雷帕霉素在医药应用领域具有广泛前景。

当前雷帕霉素的生产主要通过发酵法生产，如中国发明专利申请公布书CN101486976A所述一般西罗莫司发酵效价只有200μg/ml左右，发酵副产物较多，导致后序提取时的层析分离比较困难，工作较为复杂，酵培养的发酵液经过滤得菌体后经甲醇萃取浓缩后，再通过一系列纯化工艺如色谱层析、萃取、结晶等获得西罗莫司纯品，产品收率低于20％。所以该说明书公开了一种吸水链霉菌及其应用的技术方案，提供了一种高单位的西罗莫司产生菌，效价为600μg/ml以上，但是产品收率只达到了30～35％。

CN102443012A公布了一种高纯度提取纯化方法a.用丙酮或乙醇抽提发酵液过滤后得到的菌丝体，得到抽提液后，真空浓缩得浓缩抽提液；b.用乙酸乙酯萃取发酵液过滤后得到的上清液，分离乙酸乙酯相得萃取液，真空浓缩得浓缩萃取液；c.将a中的浓缩抽提液和b中的浓缩萃取液合并得浓缩液，并加入到装有大孔树脂的床层进行吸附，用丙酮和水的混合溶液作为洗涤剂洗涤大孔树脂，收集洗脱液并真空浓缩，得浓缩洗脱液；d.用乙酸乙酯萃取c得到的浓缩洗脱液，经无水硫酸钠或无水硫酸镁脱水后真空浓缩得浓缩液，上样硅胶柱进行层析分离，正庚烷和丙酮混合溶液作为洗涤剂洗涤硅胶柱，正庚烷和丙酮混合溶液作为洗脱剂洗脱硅胶柱，收集洗脱液并真空浓缩得浓缩液；e.将步骤d得到的浓缩液溶于石油醚或乙醚中结晶，干燥得到雷帕霉素粗品。f.丙酮溶解雷帕霉素粗品，真空浓缩后用乙醚重结晶，干燥得到雷帕霉素纯品。

Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669)是一种选择性的mTOR抑制剂，IC50为0.2 nM；对mTOR信号通路的抑制作用及与FKBP12结合能力和Rapamycin接近。Phase 3。 使用Deforolimus处理HT-1080细胞，抑制S6和4E-BP1磷酸化, 这种作用存在剂量依赖性，IC50分别为0.2 nM和5.6 nM, EC50分别为0.2 nM 和1.0 nM, 且导致细胞尺寸降低，G1期细胞增多,和抑制葡萄糖摄取，EC50为0.1-1 nM。Deforolimus作用于一组细胞系，具有显著抗增殖活性，EC50为0.2-2.3 nM。Deforolimus 有效且选择性抑制VEGF产量，这种作用存在剂量依赖性， EC50为~0.1 nM。 Deforolimus作用于人NSCLC细胞系（除了 H157细胞），显著抑制细胞生长，IC30为2.45-8.83 nM,而作用于H157细胞时，IC30 >20 nM。2.8-5.9 nM Deforolimus处理A549, H1703和H157细胞（除了表达mTORC1耐药变异的H1666），使 p70S6K^Thr389去磷酸化,且作用于A549和H1703细胞，提高 pAKT^ser473和pAKT^Thr308磷酸化水平。Deforolimus和MEK抑制剂CI-1040或 PD0325901 联用处理人肺癌细胞系，具有协同作用，这种作用存在剂量依赖性，这种作用与细胞增殖受抑制而不是细胞死亡增多相关，处理24小时后，抑制40%核糖体合成，且使多核糖体/染色单体比例下降。 Deforolimus处理携带PC-3 (前列腺), HCT-116 (结肠), MCF7 (胸腺), PANC-1 (胰腺)或A549 (肺) 移植瘤的小鼠，具有显著抗癌效果，这种作用存在剂量依赖性，且作用于SK-LMS-1移植瘤，抑制mTOR信号。