免疫印迹实验--WESTERN BLOTTING新闻专题

免疫印迹是几种相对分子质量不同的蛋白质先经SDS-PAGE凝胶电泳分离出不同的条带，再转印至硝酸纤维膜上，然后用酶标记的抗体对条带进行显色和鉴定。此法兼有SDS-PAGE的高分辨率和免疫反应的高特异性等优点，常用于检测不同基因所表达的各种微量蛋白质抗原。免疫印迹用于鉴定能够与特异性抗体相互作用的大分子抗原（一般为蛋白质）并测定抗原的大小。蛋白质首先通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纤维素膜，聚偏乙烯二氟（PVDF）膜和阳离子尼龙膜等。首先把膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射，生色或化学发光的方法进行定位。