武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗USP7（泛素特异性蛋白酶7，又称HAUSP）多克隆抗体（货号：A300-033A），经抗原亲和纯化，特异性识别人类和小鼠USP7蛋白。抗体适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）。以未偶联（Unconjugated）的全IgG形式提供，浓度高达1000 µg/ml。产品保存于2–8°C，有效期自收货之日起为1年，原产于美国，适用于去泛素化机制、p53信号通路及肿瘤生物学研究。

二、核心技术规格

参数项 | 具体规格

靶标 | USP7（泛素特异性蛋白酶7）

反应种属 | 小鼠、人

适用实验 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 全IgG

免疫原 | 人USP7蛋白第1至50位氨基酸区域

同种型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属来源 | 人

浓度 | 1000 µg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

表位信息：抗体识别的表位定位于人USP7蛋白的N端第1至50位氨基酸之间（参考序列NP_003461.1，GeneID 7874）。该区域靠近USP7的TRAF样结构域（参与与底物如p53、MDM2的相互作用），N端特异性确保抗体能够识别全长USP7而不受C端修饰影响。

三、产品制备与质量控制

3.1 纯化工艺

抗体采用抗原亲和纯化：将对应人USP7蛋白N端1–50位氨基酸的合成多肽共价固定于固相支持物上，使兔免疫血清过柱，特异性IgG被吸附；经充分洗涤去除未结合蛋白后，以低pH缓冲液洗脱目标抗体，随后中和、透析并置换至含防腐剂的缓冲液中。

3.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度通过比尔-朗伯定律确定：1 mg/ml纯化IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本产品批次实测A280值经换算确保浓度为1000 µg/ml，批间一致性高。

3.3 纯度与特异性验证

抗原亲和纯化工艺可有效去除兔血清中的非特异性IgG及其他血清蛋白。经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色评估，抗体纯度典型值≥95%。功能性特异性通过以下方式验证：

在USP7敲除细胞裂解物中WB检测无信号

过表达USP7的细胞中信号显著增强

免疫沉淀后质谱鉴定确认仅富集USP7及其已知底物（如p53、MDM2）

四、推荐应用与稀释方案

以下用量和稀释范围为推荐起始值。由于不同实验体系存在差异，用户需根据预实验结果进行优化。

4.1 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释范围：1:10,000 – 1:25,000

封闭与抗体稀释液：含5%脱脂奶粉的TBST（Tris缓冲盐+0.1% Tween-20）

一抗孵育条件：4°C 过夜（推荐）

推荐二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，货号A120-101P

特殊注意事项：当对免疫沉淀产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（轻链特异性），并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免重链交叉反应干扰。

阳性对照：HeLa、HEK293T、MCF7或小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）全细胞裂解液。USP7在多种细胞系中普遍表达，分子量约为135 kDa。

操作提示：USP7分子量约135 kDa，建议使用8–10% SDS-PAGE凝胶。转膜推荐使用0.45 µm PVDF膜，湿转法（100 V，1.5小时或4°C过夜）。由于USP7表达水平较高，通常30–50 μg总蛋白上样量即可获得清晰信号。

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 µg 抗体 / mg 细胞裂解液总蛋白

裂解液选择：推荐使用温和非变性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4、蛋白酶抑制剂混合物）。USP7与底物（如p53、MDM2）的相互作用依赖于非变性条件，避免使用SDS等强变性剂。

孵育条件：裂解液与抗体4°C旋转孵育2–4小时或过夜，随后加入Protein A琼脂糖珠继续孵育1–2小时。

洗脱：可采用SDS-PAGE上样缓冲液煮沸5分钟洗脱，或使用低pH甘氨酸缓冲液进行非变性洗脱以保留复合物功能。

阴性对照：使用同种型兔IgG（非免疫IgG）进行平行沉淀，以评估非特异性背景。

注意：USP7常与MDM2和p53形成三元复合物，免疫沉淀可同时检测这些相互作用蛋白。推荐使用轻柔洗涤（如裂解液洗涤3次），维持复合物稳定性。

4.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

推荐稀释范围：1:1,000 – 1:5,000

抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（10 mM，pH 6.0）进行热诱导抗原修复（微波或高压）

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

检测系统：推荐使用聚合物标记的HRP二抗系统

阳性对照组织：人乳腺癌组织、结肠癌组织或小鼠肝组织。USP7在多数肿瘤细胞核和胞浆中呈阳性。

IHC操作提示：USP7定位于细胞核（为主）和细胞浆，染色模式因细胞类型和状态而异。建议在封闭步骤中使用5%正常山羊血清阻断非特异性结合。一抗4°C孵育过夜可获得最佳信噪比。