在抗体药物研发、重组蛋白表达分析、细胞株筛选等生物医药研究场景中，人 IgG 抗体与携带 hFc 标签的融合蛋白定量检测是每日高频开展的基础实验。传统手工检测不仅操作繁琐、人为误差大，常规反应体系还会造成样本与试剂的大量损耗，大批量样本筛查更是耗时费力。
本次结合UniOne® TR-FRET Human IgG 夹心检测试剂盒与 G3 系列自动化移液工作站，针对10 μL 微型反应体系开展应用测试，验证了这套 “试剂 + 自动化设备” 组合方案的综合性能。下面结合完整实验流程、实测数据，为大家全面解读这套高效、低成本的 IgG 定量新方案。
一、实验背景与测试目标
1. 应用刚需
UniOne® TR-FRET Human IgG 夹心检测试剂盒依托均相时间分辨荧光（TR-FRET）技术，凭借免洗、操作简单、灵敏度高的特点，已成为细胞上清中人 IgG、hFc 标签蛋白定量的主流工具。随着药物筛选、高通量样本检测需求不断增加，行业对实验体系提出了新要求：缩小反应体积以节约珍贵样本与试剂、引入自动化设备降低人工误差、提升实验整体重复性与检测效率。
2. 核心测试目标
本次实验主要完成两项验证：
将原有检测体系小型化，优化为10 μL 微量反应体系，评估微型体系下的检测效果；
搭配 G3 自动化移液工作站，验证全流程自动化操作的稳定性、数据重现性，判断方案是否适配高通量检测场景
二、全套实验配置
本次测试选用行业主流设备与耗材，组合适配常规实验室及自动化筛选平台，具体配置如下：
· 核心试剂：UniOne® TR-FRET Human IgG Sandwich Assay Kit（人 IgG TR-FRET 夹心检测试剂盒）
· 实验耗材：96 V 型酶标板、384 浅孔板
· 自动化设备：LabGenius G3 系列移液机器人
· 检测设备：Tecan INFINITE 200 PRO 多功能酶标仪
三、完整实验流程
本次实验分为手工预处理和自动化运行两大阶段，流程标准化、步骤简洁，整体耗时大幅压缩。
1.手工准备阶段（总耗时约 30 min）
首先在 96 V 型酶标板中完成基础配液工作，依次加入稀释缓冲液、浓度为 40 μg/mL 的 IgG 标准品原液、抗体混合液（Antibody Mix），同时配制高、中、低三个浓度的质控样本（QC H、QC M、QC L），用于后续数据准确性校验。其中手工操作耗时 15 min，自动化程序编写耗时 15 min。
2.自动化移液与反应阶段（自动化运行仅约 16 min）
· 利用 G3 工作站对标准品原液进行2 倍梯度稀释，设置 11 个浓度梯度点；
· 在 384 浅孔板中自动化加入 5 μL 抗体混合液，完成后手工 1000 g 离心 1 min；
· 向孔板中依次加入梯度稀释的标准品与三份 QC 质控样本（均设置复孔），再次 2000 g 离心 1 min；
· 封膜后室温避光孵育 1.5 小时，最后使用酶标仪读取 TR-FRET 荧光信号，完成定量检测。
整套流程全程无需洗板，完美延续了 TR-FRET 均相技术的核心优势。
四、实测数据与结果解读
本次实验从标准曲线拟合、复孔重复性、质控样本回收率、独立实验重现性四个维度进行评估，各项指标表现优异。
1. 标准品梯度检测与重复性
实验设置 11 个梯度浓度的 IgG 标准品，覆盖高、中、低浓度区间，统计每组复孔的荧光信号与变异系数（CV 值）：
全浓度梯度下样本复孔 CV 值整体偏低，平均 CV 仅 1.8%。CV 值是评判实验重复性的核心指标，数值越小代表平行样本数据差异越小，这说明在 10 μL 微体系 + 自动化操作模式下，移液、反应环节的误差被有效控制。
2. 标准曲线拟合效果
基于梯度标准品数据绘制定量标准曲线，曲线拟合系数 R² = 0.9963，EC₅₀=128.0 ng/mL。
R² 无限趋近于 1，证明荧光信号与 IgG 浓度呈现极佳的线性相关关系，依托该曲线计算待测样本浓度，结果精准可靠，完全满足定量实验要求。
3. 质控样本（QC）回算结果
高、中、低三份质控样本的浓度回算值与理论值高度吻合：
QC H、QC M、QC L 三组样本 CV 值分别为 6.84%、0.80%、5.83%；
中浓度质控样本 CV 低至 0.80%，即便高低浓度区间，数据波动也在合理范围内，证明体系对不同浓度 IgG 样本均具备稳定的定量能力。
4. 独立重复实验验证
为进一步验证方案长期稳定性，开展两次独立重复实验对比测试：
两次实验标准曲线 R² 分别为 0.9967、0.9963，EC₅₀分别为 118.5 ng/mL、128.0 ng/mL；
三组 QC 样本两次检测结果 CV 值均低于 5%。
两次独立实验的数据高度一致，足以证明：这套 “试剂盒 + 自动化工作站” 的组合方案稳定性强，可长期用于常规检测与高通量筛选工作。
核心实验结论
UniOne® TR-FRET 人 IgG 夹心检测试剂盒可成功适配10 μL 微型反应体系，结合 G3 自动化移液平台后，在大幅缩减试剂、样本用量的同时，依旧保持高精准度与优异重复性。
五、这套组合方案的五大核心优势
结合实验过程与数据表现，相比传统手工大体系检测，新方案优势十分突出：
1.微量体系，降本增效
反应体系缩小至 10 μL，大幅减少珍贵细胞上清样本、检测试剂的消耗，长期开展大批量实验可显著降低实验成本。
2.自动化操作，误差更低
依托移液机器人完成梯度稀释、加样等重复操作，彻底规避人工移液、配液带来的主观误差，数据稳定性全面提升。
3.重复性优异，数据可信
全梯度样本平均 CV 仅 1.8%，独立重复实验结果无明显偏差，实验数据可直接用于药物研发、论文发表等正式场景。
4.检测性能强劲
标准曲线拟合度高，线性范围广，高低浓度 IgG 样本均可精准定量，适配不同表达水平的 IgG 样本检测。
5.通量灵活，场景兼容
采用 384 孔板体系，既可以满足实验室小批量样本检测，也能支撑药企、CRO 机构上万样本的高通量抗体筛选工作。
六、主流应用场景
这套自动化微量 IgG 定量方案，可广泛应用于生物医药全产业链：
· 治疗性抗体药物研发：单克隆抗体、双抗等抗体药细胞培养上清浓度监测；
· 细胞株筛选：抗体表达细胞株的高通量筛选与表达能力评估；
· 重组蛋白研究：各类携带 hFc 标签融合蛋白的定量分析；
· 基础免疫学实验：大批量细胞样本中内源性 IgG 的常规检测。
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