1YR企业会员
发布人：上海曼博生物医药科技有限公司
发布日期:2026/3/12 14:41:01
点击下图查看哈佛官网资讯⬇️
哈佛官网认证Nuclera蛋白合成系统已完成装机（点击跳转）
英国Nuclera公司的eProtein Discovery是一个无细胞蛋白质合成（CFPS）系统，也被称作体外转录/翻译系统，能够实现蛋白质的快速原型设计。该系统采用数字微流控芯片和定制试剂，可针对多达192种条件筛选蛋白质表达与可溶性，包括在8种无细胞表达条件下对至多24种构建体的筛选。可在48小时内完成从DNA到蛋白质筛选与放大生产。
B 淋巴细胞抗原CD19是一种跨膜糖蛋白，为B细胞恶性肿瘤生物标志物、CAR-T等疗法理想靶点，包含单个跨膜螺旋（292-313）、天然信号肽（1-20）、胞外N端结构域（ECD）和胞内C端结构域（ICD）。其ECD有两个通过二硫键连接的免疫球蛋白样C2型结构域，ICD有多个无序区域。生产CD19，尤其是ECD对开发新的B细胞淋巴瘤治疗方法十分重要。然而，ECD素来有“难表达”的特点，会导致表达滴度低、蛋白质错误折叠和聚集，阻碍了对细胞表面分子的详细分子研究。
在本应用中，我们利用eProtein Discovery系统的可溶性标签选择功能和无细胞混合物，在24小时内筛选了192种表达条件，优化了可溶性CD19蛋白的生产（如图1所示）。我们成功表达并纯化了全长CD19、ECD和ICD。筛选完成后，在24小时内将适合条件进行放大，可生产微克级的蛋白质，从而实现了治疗研究所需复杂蛋白质的提效生产。本应用为表达其他具有跨膜结构域、二硫键和高度无序区域的“难表达”蛋白质提供了参考。
eProtein Discovery系统利用无细胞蛋白质合成技术，可快速筛选蛋白质构建体并放大生产复杂蛋白质（图1）。
图1. eProtein Discovery工作流程。从DNA到可溶性蛋白只需48小时。
在本研究中，选择了三种CD19长度变体：全长CD19（CD19_21-556）、N端截短体（CD19_21-277）和C端截短体（CD19_327-556）。这两种截短体均去除了CD19的跨膜区域。此外，全长和N端截短体均省略了初始信号肽序列（0-20）。
图2. 实验筛选条件。（A）为三种CD19长度变体生成的带有可溶性标签的 eGene 构建体。
图2. 实验筛选条件。（B）用于提高可溶性蛋白产量的无细胞混合物选择。
eProtein Discovery系统成功表达并纯化了全长CD19蛋白及其截短变体，证明了其强大的性能（见图3）。
图3A：筛选结果：每种eGene构建体与无细胞混合物组合的表达产量。
图3B：筛选结果：纯化浓度分析。
图3C：200μL放大体系的预测产量。
通过同步测试不同CD19蛋白构建序列、可溶性标签及蛋白表达参数，eProteinDiscovery可在24小时内快速确定合适的蛋白表达条件，并在48小时内获得目标蛋白。
无细胞蛋白质合成（CFPS）系统是一种在体外环境中完成蛋白表达的技术，无需依赖活细胞培养即可进行蛋白质的快速原型设计与筛选。
eProtein Discovery系统可针对多达192种条件筛选蛋白质表达与可溶性，并可在48小时内完成从DNA到蛋白质筛选与放大生产。
CD19尤其是ECD存在表达滴度低、蛋白质错误折叠和聚集等问题，同时其结构中还包含跨膜区域、二硫键和无序区域，因此在传统系统中制备较具挑战性。
#Nuclera #无细胞蛋白表达 #CFPS #CD19 #蛋白筛选 #蛋白表达系统
#Nuclera eProtein Discovery #无细胞蛋白质合成 #CFPS系统 #CD19蛋白表达 #蛋白筛选 #无细胞蛋白筛选 #nuclera #曼博生物
说明：本文内容整理自 Nuclera 相关技术资料。 上海曼博生物（MineBio）为 Nuclera 品牌在中国地区的官方代理商，长期关注无细胞蛋白表达等前沿技术在生命科学研究中的应用。
更多技术信息可参考：
https://www.mine-bio.com/Nuclera-article/Nuclera-Article-02.shtml
相关新闻资讯
