猪繁殖与呼吸障碍综合征（猪蓝耳）病毒IgG抗体 检测试剂盒（酶联免疫法） 使用说明

           猪繁殖与呼吸障碍综合征（猪蓝耳）病毒IgG抗体

检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

【产品名称】

通用名：(猪繁殖与呼吸综合征)高致病性猪蓝耳病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (ELISA)

【包装规格】 96T/盒

【预期用途】

本试剂盒用于检测猪血清中猪蓝耳病毒抗体。评估猪场猪蓝耳苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。

【原    理】

本试剂盒系由预包被猪蓝耳病毒（PRRSV）蛋白的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清或血浆中猪蓝耳病毒特异性抗体。实验时，在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有猪蓝耳病毒的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。

【试剂盒组成】

【样品制备】  取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，

              长期需置-20℃保存。

【样品稀释】  用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对

              照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作

              20倍稀释。
【试验操作方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

   3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl；空白对

     照孔不加。

    4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。

【结果判定】

    定义：N=阴性对照孔平均A值；P=阳性对照孔平均A值；S=样品孔A值；S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。

1.正常情况下P/N≥2.1即试验成立；否则不成立。

2.S/P≥0.4时判为阳性，S/P＜0.3时判为阴性，0.3≤S/P＜0.4时判为可疑。

当本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性检测猪蓝耳病毒IgG抗体，不能区别疫苗免疫和野毒感染。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板

  开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月)。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

【储  存】

原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。

【有效期】

有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。