灭活内源性酶及封闭内源性生物素

发布人：上海源叶生物科技有限公司

发布日期:2013/12/26 11:19:51

在生物体组织内均含有一定量的内源性酶和内源性生物素，如富含血细胞的组织标本有大量具有活性的过氧化物酶，肝、脾、肾、脑及胚胎组织中富含生物素。如采用过氧化物酶检测系统或碱性磷酸酶和NBT/BCIP显色系统进行免疫组织化学染色时．酶的作用是催化底物，使显色剂显色，而组织中的内源性酶同样也能催化底物，使其显色，这就影响免疫组织化学染色的特异性。在使用亲和素试剂的免疫组织化学染色中，内源性生物素易结合亲和素，形成亲和素一生物素复合物，导致假阳性。所以在染色之前应设法将组织内的内源性酶灭活或将内源性生物素封闭，以保证染色的特异性。

(1)灭活内源性过氧化物酶：将组织在3％甲醇―H₂ O₂ (3ml纯甲醇中加入30％H₂ 0₂ 0．3ml，现用现配)中室温浸泡10分钟，继而用PBS冲洗3次，每次5分钟。

(2)灭活碱性磷酸酶：最常用的方法是将左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH为7．6～8．2，可除去大部分内源性碱性磷酸酶，对于仍能干扰染色的酸性磷酸酶可用0．05mol/L酒石酸抑制。

(3)封闭内源性生物素：将组织切片用0．0l％亲和素溶液室温处理10～20分钟，使其结合位点饱和，以消除内源性生物素的活性。也可购买生物素阻断剂试剂盒，其中A液为亲和素．B液为生物素。使用时加A液l滴，室温10分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；加B液1滴。室温10分钟．PBS冲洗3次，每次2分钟。