小鼠黑色素瘤细胞

小鼠黑色素瘤细胞B16-F10是来源于C57BL/6J小鼠自发性肿瘤细胞，在显微镜下呈成纤维细胞样。这种细胞的增殖能力很强，仅需接种少量细胞，便可在数天后形成克隆。另外它还具有侵袭性强、成瘤率高等特点，被认为是构建肿瘤模型理想的细胞，几乎所有科研人员建立肿瘤模型时会考虑使用B16-F10细胞。

1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）小鼠黑色素瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）小鼠黑色素瘤细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。