SW48细胞 用途与合成方法
SW48细胞是从结肠腺癌中分离建立的细胞系,该细胞合成癌胚抗原,能在裸鼠中成瘤。
SW480源自原位直肠腺癌,CSAp和直肠抗体阴性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代,309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代。细胞p53蛋白表达水平提高。癌基因c-myc,K-ras,H-ras,N-ras,myb,sis和fos的表达呈阳性。癌基因N-myc的表达未做检测。不表达细胞溶解酶,一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称该细胞表达GM-CSF。ras原癌基因的12位密码子有一个突变,可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若SW48细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
3.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。