CCK试剂盒

CCK试剂盒可以用于SCD1促进低氧乏养胰腺癌细胞铁死亡抵抗作用及机制研究。

A．制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1）、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2）、按比例（如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3）、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

B．细胞活性检测

1）、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5%CO2的条件下）。

2）、向每孔加入10μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3）、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4）、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5）、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

C．细胞增值-毒性检测

1）、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5%CO2的条件下）。

2）、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3）、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4）、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5）、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6）、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7）、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。