人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(SERPINA3G)ELISA KIT

人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(SERPINA3G)ELISA KIT用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(SERPINA3G)ELISA KIT可用于蝎丝氨酸蛋白酶抑制剂Sj7170促神经胶质瘤生长和转移研究。

1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡z0分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

4.所有液体组分使用前充分摇匀。

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因的含量。 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因水平。用纯化的丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)基因含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。