土壤基因组DNA提取试剂盒

土壤样品存在大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，而纯化的DNA 中只要有这些微量物质的存在，都会影响到PCR等酶促反应。本公司的土壤试剂盒采用独特的腐殖酸去除液（缓冲液R2）能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。 1.称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入700μl缓冲液R1与100μl缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。 注意：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤，缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。 2.加入100μl缓冲液R3（R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用），涡旋混匀。70℃水浴处理10min。期间振荡几次。 3.12000 rpm(~13,000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl缓冲液R4混匀。 4.冰上放置5分钟。12000 rpm(~13,000g)离心1分钟。转移上清到新的1.5ml离心管中。 5.加入与上清等体积的缓冲液R5（使用前请检查是否已加入异丙醇），颠倒混匀。 6.取750μl混合液加到吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000 rpm(~13,000g)离心30秒，倒掉滤出液。 7.将剩余的混合液加到吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm(~13,000g)离心30秒，倒掉滤过液。 8.向吸附柱CG中加入500μl漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm(~13,000×g)离心30秒，倒掉废液。 9.向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm(~13,000g)离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。 10.向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液PW，12,000 rpm(~13,000g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。 11.12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 12.将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟。 13.DNA产物-20℃保存。 本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年。缓冲液R2和R3可能有沉淀产生，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。 基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。