富马酸替诺福韦酯

富马酸替诺福韦是美国Gilead公司开发上市的一种核苷酸类抗病毒药，于2001年经美国FDA批准用于治疗人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)感染。2002年在欧盟上市，批准用于HIV-1和慢性乙型肝炎的治疗。富马酸替诺福韦酯作为核苷酸逆转录酶抑制剂，是一种可口服的开环核苷酸磷酸酯类前药，口服吸收后迅速转变成替诺福韦而发挥药效。由于生物利用度高、疗效确切且耐受性好，TDF现已成为推荐使用的一线抗HIV药物，销售额最高。专利文献报道了富马酸替诺福韦酯的合成方法，但存在部分中间体杂质多、光学纯度低、操作困难、收率低、富马酸含量不合格及不适于工业生产等问题。 替诺福韦酯是替诺福韦双异丙酰氧基甲酯延胡索酸盐，是替诺福韦的酯类前体，是一种无环的5'-单磷酸腺苷类似物，具有广谱抗病毒作用，可抑制HIV-1、HIV-2的反转录酶及HBV聚合酶，从而抑制病毒复制。口服后，TDF水解为替诺福韦，后者被细胞激酶磷酸化成具有药理活性的代谢产物替诺福韦二磷酸，后者与5'-三磷酸脱氧腺苷酸竞争，参与病毒DNA的合成，进入病毒DNA后由于缺乏3'-OH而导致DNA延长受阻，从而抑制病毒的复制。 富马酸替诺福韦用于有病毒复制证据以及和血清转氨酶(ALT或AST)持续升高或肝活动性病变证据的CHB成年患者。包括HBeAg阳性或HBeAg阴性的代偿期CHB的成年患者。 Tenofovir Disoproxil Fumarate (GS-1278, Tenofovir DF)属于一类抗逆转录病毒药物，其通过与天然底物脱氧腺苷5’-三磷酸盐竞争以及整合到DNA后终止DNA链抑制HIV reverse transcriptase活性。

Target	Value
HIV reverse transcriptase (Cell-free assay)

Tenofovir的循环经肾脏通过肾小球滤过和肾小管主动分泌。Tenofovir不是人有机阳离子转运1型（hOCT1）或hOCT2的底物。在MRP4过表达细胞中，Tenofovir积累到五倍较低水平，MRP抑制剂可提高其累积。 在人肝母细胞瘤（肝癌）细胞，骨骼肌细胞（SkMCs）或肾近端小管上皮细胞中，Tenofovir并不显著影响线粒体DNA（mtDNA）的。在HepG2细胞或SkMCs中，Tenofovir升高的乳酸生产小于20％。 在HepG2细胞和人原代肝细胞中，Tenofovir是替诺福韦二磷酸（TFV-DP）有效的磷酸化。在基于细胞的测定中，Tenofovir抗HBV的50％有效浓度是1.1 mM，加入bis-isoproxil前基团之后有效率提高50倍。在体外和临床中，Tenofovir对lamivudine耐药HBV有充分的活动。 Tenofovir抑制肝源性肝癌细胞和正常骨骼肌细胞的增殖，CC（50）值分别为398 μM和870 μM。Tenofovir比cidofovir对肾近曲小管上皮细胞的增殖和生存能力影响弱，cidofovir具有潜在的相关的核苷酸类似物诱导肾小管功能障碍。

核苷酸逆转录酶抑制剂，是泰诺福韦（PMPA，2）的前药，临床主要用于治疗人类免疫缺陷病毒感染

以氯甲基碳酸异丙酯、富马酸及(R)-(((1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸为原料，合成(R)-(((((1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧基)甲基)磷酰基)双(氧基)双(亚甲基)二异丙基二碳酸酯富马酸盐的一般步骤如下：在反应釜中加入替诺福韦（PMPA）4.0g、N-甲基吡咯烷酮15mL及三乙胺5.8mL。将反应混合物加热至63℃并搅拌30分钟，随后加入氯甲基异丙基碳酸酯10g，保持该温度继续搅拌4小时。反应完成后，将混合物冷却至室温，进一步冷却至5℃，并缓慢加入预冷至15℃以下的蒸馏水25mL。在15℃下搅拌1小时后，用二氯甲烷15mL进行两次萃取。合并有机层，用蒸馏水10mL洗涤两次，随后用硫酸镁干燥。过滤后，减压浓缩有机层，得到替诺福韦地索普西（TD）油状物。将TD油状物溶解于异丙醇35mL中，加入富马酸1.6g，升温至50℃搅拌至完全溶解。随后缓慢冷却至25℃，再进一步冷却至3℃，保持此温度搅拌4小时。过滤析出的晶体，用异丙醇洗涤，并于40℃下真空干燥，得到替诺福韦地索普西富马酸盐（TDF）4.7g，产率53%。将所得TDF 4.7g溶解于异丙醇40mL中，加热至50℃搅拌至完全溶解。缓慢冷却至25℃，再冷却至3℃，保持此温度搅拌4小时。过滤晶体，用异丙醇洗涤，并于40℃下真空干燥，最终获得TDF晶型4.3g，产率90%。

参考文献：

[1] Patent: KR2016/38627, 2016, A. Location in patent: Paragraph 0121; 0122; 0123; 0124

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