WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞

WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞与RWPE-1 cells(ATCC CRL-11609)一样，来源于同一张成人前列腺组织切片的周围区域的基质细胞。

WPMY-1通过一个pRSTV质料结构，用SV40大T抗原对基质细胞进行永生化。WPMY-1细胞，与RWPE-1细胞及其它上皮细胞衍生株一样，属于来源于同一个前列腺的一系列细胞株。

WPMY-1细胞与RWPE-1细胞来源于同一张成人前列腺组织切片的周围区域的基质细胞，通过pRSTV质粒用SV40大T抗原对基质细胞进行永生化。由于WPMY-1细胞与RWPE-1细胞来源于同一个前列腺的周围区域，WPMY-1细胞株对于研究分泌和基质与上皮细胞相互作用尤其有用。据提供者报道，来源于同一个前列腺的RWPE-1细胞株，经过检测，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈阴性。 1） 来源：前列腺
2） 形态：成肌细胞，贴壁生长

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

成肌细胞样(梭形或多角形) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 前列腺基质；SV40转化；男性；54岁 贴壁细胞