WB蛋白印迹检测

蛋白质印迹法（即免疫印迹试验，Western Blot，WB）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。也称Western、Western blotting、Western印迹，常简写为WB，是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到固相支持物PVDF或NC膜膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 免疫印迹法（western blot，WB）是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术，用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。首先利用电泳技术将不同分子量蛋白分离，然后转移至硝酸纤维素膜（NC膜）或PVDF膜，再利用抗原抗体结合并染色的原理，检测目的蛋白的表达水平。 其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 （1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。