CRENIGACESTAT

Crenigacestat (LY3039478) 是一种有效的Notch和 gamma-secretase 的抑制剂，其对Notch的IC50值为0.41 nM。

Target	Value
Notch ()	~1 nM

LY3039478是一种Notch-1胞内区域剪切的有效抑制剂，在大多数所检测的肿瘤细胞中IC50中约为1 nM。LY3039478也有效地抑制突变型Notch受体活性。LY3039478可显著地抑制两种肾透明细胞癌细胞的生长。其处理可减少Myc和cyclin A1的表达，引起透明细胞癌细胞在G0/G1期的细胞阻滞。

在大鼠中，其口服生物利用度为65%，CL=98 mL/min/kg, VDss=4.9 L/kg。在狗中，口服生物利用度为67%，CL=3.8 mL/min/kg, VDss=1.4 L/kg。在异种移植瘤模型中，LY3039478可在肿瘤微环境中抑制N1ICD的剪切以及Notch靶基因的表达。在依赖于Notch信号的移植瘤模型中，Notch剪切的抑制诱导了凋亡的产生。在免疫缺陷NSG携瘤小鼠（移植769-P CCRCC细胞）中，LY3039478可显著地提高其生存率、延迟肿瘤生长。

在0℃下，将(2S)-2-(4,4,4-三氟丁酰基氨基)丙酸（28.9g，135.7mmol）和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（29.7g，155.1mmol）依次加入(7S)-7-氨基-5-(2-羟乙基)-7H-吡啶并[2,3-d][3]苯并吖庚因-6-酮（34.8g，129.2mmol）的二氯甲烷（696mL）悬浮液中，搅拌5分钟。随后加入1-羟基苯并三唑一水合物（24.7g，155.1mmol），继续搅拌1小时后，将反应混合物升温至室温。再加入(2S)-2-(4,4,4-三氟丁酰基氨基)丙酸（0.6g，2.6mmol），室温下搅拌15分钟。反应完成后，加入水（600mL），过滤收集白色固体，分离滤液层。有机层用水（3×200mL）洗涤，硫酸钠干燥后浓缩，得到浅棕色泡沫。将该泡沫在50%甲基叔丁基醚/己烷（500mL）中制成浆料，过滤收集固体，高真空干燥，得到65g固体。将所得固体（65.0g，140.0mmol）溶于甲醇（195mL）中，加入水（195mL）和碳酸氢钾（14.0g，140.0mmol），在10℃下搅拌29小时。反应混合物浓缩后，用二氯甲烷（3×50mL）萃取。合并的有机层用水（3×20mL）洗涤，硫酸钠干燥后浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用甲醇:二氯甲烷（98:2,7N氨水溶液）作为洗脱剂。纯化后的产物先后用50%甲基叔丁基醚/己烷和甲基叔丁基醚（500mL）研磨。最后，固体用甲基叔丁基醚（200mL）和己烷（200mL）洗涤，高真空干燥，得到4,4,4-三氟-N-((S)-1-(((S)-5-(2-羟乙基)-6-氧代-6,7-二氢-5H-苯并[d]吡啶并[2,3-b]氮杂卓-7-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)丁酰胺，为灰白色固体（42.0g，90.4mmol，产率65%）。质谱（m/z）：270（M+1）；[α]Na25 = -153.40°（c = 5.0，甲醇）。

参考文献：

[1] Patent: US2013/29972, 2013, A1. Location in patent: Paragraph 0052-0054

[2] Patent: WO2016/168014, 2016, A1. Location in patent: Page/Page column 18; 19