小鼠睾丸间质细胞

小鼠睾丸间质细胞是取自小鼠睾丸间质的上皮细胞样贴壁细胞，小鼠睾丸间质细胞在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应。小鼠睾丸间质细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关；在LH存在下，小鼠睾丸间质细胞可以代谢胆固醇。生长培养基：DMEM/F12＋5%HS＋2.5%FBS＋1%P/S，培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%，温度：37℃。 小鼠睾丸间质细胞分离自睾丸组织。睾丸间质细胞是睾丸中一种重要的细胞类型，主要位于曲精小管之间。胞体呈圆形、椭圆形或不规则形，胞体较大，直径约20μm。胞质呈嗜酸性，细胞核呈圆形或卵圆形，常位于中央，染色较淡，有1～2个核仁。线粒体多，呈管嵴状，无分泌颗粒。睾丸间质细胞的主要功能是分泌和合成睾丸酮（睾酮），这是一种重要的雄性激素。睾丸酮在刺激精子发生、精子成熟及性功能的维持等方面具有重要作用。从青春期开始，睾丸间质细胞受垂体前叶嗜碱性细胞分泌的间质细胞刺激素（黄体生成素）的作用，能合成并分泌雄性激素。睾丸间质细胞在生殖医学、内分泌学以及药物研发等领域具有重要的研究价值。例如，以睾丸支持细胞为靶向的药物研究备受关注，体外培养的睾丸支持细胞能直接反应药物对该细胞作用的特点。

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10S的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

成纤维细胞样 睾丸组织 小鼠睾丸间质细胞采用胶原酶消化法制备而来。