人破骨细胞

破骨细胞（Osteoclast，OC）是体内唯一的具有骨吸收活性的多核细胞，具有2-50个细胞核，直径100μm左右。破骨细胞由血液及骨髓中的单核/巨噬细胞系分化而来，其分化过程经历破骨细胞前体（osteoclast precursor cells，OPCs，或称preosteoclasts）、融合的多核破骨细胞（non-functional polykaryons）、成熟破骨细胞（mature osteoclasts，也称极化的多核破骨细胞）等几个阶段。骨骼是一种动态组织，在结构应力和人体对钙的需求等影响下，骨骼不断被分解和重组。破骨细胞是骨骼持续破坏的介质，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。破骨细胞的异常激活会导致骨丢失，常见于如绝经后骨质疏松症或类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。
破骨细胞(osteoclast，亦称bone-resorbing cells)是骨组织成分的一种，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨细胞与成骨细胞（osteoblast，亦称bone-forming cells）在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和组织蛋白酶K（cathepsin K)是破骨细胞主要标志 1) 组织来源于人的骨髓或者外周血组织。本细胞为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞后直接用于后续实验，不要进行扩增培养。 人破骨细胞采用机械分离法/密度梯度离心法和骨髓单核细胞诱导法制备而来，人破骨细胞分离自骨组织和骨髓；破骨细胞是骨组织中的多核巨细胞，位于骨组织表面的浅凹处。破骨细胞(osteoclast，亦称bone-resorbing cells)是骨组织成分的一种，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨细胞与成骨细胞（osteoblast，亦称bone-forming cells）在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和组织蛋白酶K（cathepsin K)是破骨细胞主要标志。 破骨细胞占据骨头表面的小凹陷，称为Howship腔隙；这种腔隙被认为是由破骨细胞的酶对骨骼的侵蚀引起的。破骨细胞产生许多酶，其中主要是抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acidic phosphatase, Trap），Trap特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物 1:2传代 将分离纯化的大鼠周围血单个核细胞，用含10％FBS、50ng／mlRANKL、20ng ／mlM－CSF、100U／ml青霉素、100U／ml链霉素的 α－MEM培养液重悬，调整细胞密度为1×105个／ml。再将配制好的细胞悬液接种到6孔培养板与直径35 mm培养皿中。直径35mm培养皿用于活细胞工作站动态跟踪成像，6孔培养板置 于CO2培养箱内，在37℃、5％CO2、饱和湿度下连续培养，用上述含RANKL、M－CSF的α-MEM 培养液换液，每3日1次。同时对整个培养过程作相差显微镜观察与活细胞成像，培养14 d作抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色。 大鼠周围血单个核细胞经RANKL、M－CSF 诱导培养2周，形成大量贴壁的多核破骨细胞后，从培养箱中取出，将培养液吸净，加入37 ℃预温的D－Hank＇s液，冲洗2次，再滴加足量的0.25％胰蛋白酶液，使其覆盖整个底面，置于37 ℃培养箱中消化5min后取出，震荡1min左右，在倒置相差显微镜下观察，当大部分细胞收缩悬起后，加入α－MEM完全培养液终止消化，用吸管反复抽吸吹打，将细胞混匀后移入15ml离心管，2000r／min，离心5min，去上清，用含RANKL、M－CSF的α－MEM完全培养液重悬细胞， 调整浓度至1×105个／ml，接种细胞至6孔培养板与直径35mm 培养皿中。同时对消化与贴壁过程作活细胞成像观察，3d后作TRAP染色。 人 骨髓 人破骨细胞采用机械分离法/密度梯度离心法和骨髓单核细胞诱导法制备而来。 按破骨细胞传代方法，将诱导培养的破骨细胞制成细胞悬液，2000r／min，离心5min，去上清，用DMSO、FBS、α－MEM 按1∶2∶7 比例配制的冻存液，重悬细胞，调整细胞浓度至5×106个／ml，加入冻存管，每支1.5ml，用冻存罐在温度为－80℃冰箱中放置24h，再移至－196 ℃液氮中冻存。 贴壁生长 从液氮中取出冻存的破骨细胞，迅速在 37 ℃水浴中震荡融解，将融解的细胞悬液加入15ml离心管中，再加6ml α－MEM完全培养液，混匀，2000r／min，离心5min，去上清，用含RANKL、M－CSF 的α －MEM完全培养液，按1×105个／ ml的细胞浓度重悬后，分别接种到6孔培养板与直径35mm培养皿中。同时对接种后的贴壁过程作活细胞成像观察，3d后作TRAP染色。 不规则细胞样，圆形细胞样