小鼠内皮抑素(ES)Elisa试剂盒

双抗体夹心法

小鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠内皮抑素(ES)抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠内皮抑素(ES)与包被抗体结合，游离的成分被洗去，依次加入生物素化的抗小鼠ES抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

小鼠

小鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒的使用操作步骤1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL， 37℃孵育90分钟 2. 加入100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 3. 洗涤3次 4. 加入100μL酶结合物工作液， 37℃孵育30分钟 5. 洗涤5次 6. 加入90μL底物溶液， 37℃孵育15分钟左右 7. 加入50μL终止液，立即在450nm波长处测量OD值 8. 结果计算。

小鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Endostatin,ES ELISA Kit，用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中内皮抑素(ES)的含量。

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中内皮抑素(ES)的含量。 本试剂盒应采用双抗体夹心法测定标本中小鼠内皮抑素(ES)水平。用纯化的内皮抑素(ES)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入内皮抑素(ES)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮抑素(ES)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中内皮抑素(ES)含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   可检测样本中小鼠的ES，且与其类似物无明显交叉反应。 内皮抑素（ES），又叫内抑素，是天然存在的20-kDaC端片段，源自XVIII型胶原蛋白。据报道，它可以用作抗血管生成剂，类似于血管抑制素和血小板反应蛋白。它是一种广谱血管生成抑制剂，可能会干扰碱性成纤维细胞生长因子（bFGF/FGF-2）和血管内皮生长因子（VEGF）等生长因子的促血管生成作用。它通过许多影响细胞活力和运动的途径抑制血管生成。