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组织总RNA小量提取试剂盒

基本属性 产品特点应用操作步骤 用途与合成方法 新闻专题 供应信息 相关产品
组织总RNA小量提取试剂盒
组织总RNA小量提取试剂盒 用途与合成方法
  • 产品特点高纯度:OD 260/280:1.9-2.1。 安全使用:无需酚/氯仿抽提。 节约时间:40-60分钟(取决于样品的类型)可从25mg的动物组织中纯化出RNA。
  • 应用组织总RNA小量提取试剂盒用于动物组织,细胞,老鼠尾巴,石蜡包埋组织基因组DNA提取,硅胶膜纯化技术,限度去除蛋白质,多糖,脂类等杂质,纯度高,整个提取过程无需乙醇沉淀和酚/氯仿抽提。
  • 操作步骤1.将组织在液氮中磨碎成粉沫。每20~30mg组织加600ulBufferRL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇),组织样本少于20mg加350ulBufferRL。样品体积不超过BufferRL体积的十分之一。 2.样品充分裂解后,室温放置5min,使蛋白核酸复合物完全分离。 3.12000rpm离心2~5min,取上清进行下步操作。 4.加入1倍体积(600ul或350ul)的70%乙醇(无RNase水配制),混匀。 5.将步骤4所得溶液全部加入到已装入收集管(CollectionTube2ml)的吸附柱(SpinColumnCR)中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 6.向吸附柱中加入350μlBufferRD,10000rpm离心15sec,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。 7.配制DNaseI混合液:取52ulDEPC-H2O,向其中加入8ul10×DNaseIBuffer和20ulDNaseI(1U/ul),混匀,配制成终体积为80ul的DNaseI混合液。 8.向吸附柱中直接加入80ulDNaseI混合液,20~30℃孵育15min。 9.向吸附柱中加入350ulBufferRD,10000rpm离心15sec,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。 10.向吸附柱中加入500ulBufferRW,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 11.重复步骤10。 12.12000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 13.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管(CollectionTube1.5ml)中,向吸附柱的中间部位悬空加入30~50ulDEPC-H2O,室温放置1min,12000rpm离心1min,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
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