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PKC蛋白激酶活性检测

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PKC蛋白激酶活性检测
PKC蛋白激酶活性检测 用途与合成方法
  • 背景蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是G蛋白偶联受体系统中的效应物, 在非活性状态下是水溶性的,游离存在于胞质溶胶中,激活后成为膜结合的酶。蛋白激酶C的激活是脂依赖性的,需要膜脂DAG的存在,同时又是Ca2+依赖性的,需要胞质溶胶中Ca2+浓度的升高。当DAG在质膜中出现时,胞质溶胶中的蛋白激酶C被结合到质膜上,然后在Ca2+的作用下被激活。同蛋白激酶A一样,蛋白激酶C属于多功能丝氨酸和苏氨酸激酶。蛋白激酶C是一种细胞质酶,在未受刺激的细胞中,PKC主要分布在细胞质中, 呈非活性构象。一旦有第二信使的存在,PKC将成为膜结合的酶,它能激活细胞质中的酶,参与生化反应的调控, 同时也能作用于细胞核中的转录因子, 参与基因表达的调控, 是一种多功能的酶。
  • 基本原理分离 PKC 蛋白(磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白),利用试剂盒组分将 2 种蛋白分离并加以区分,利用电泳琼脂糖凝胶技术显示 2 种不同的蛋白,利用分析软件将显示的不同蛋白定量并加以比较,以磷酸化 PKC 非磷酸化 PKC 灰度值 IOD 的比值显示 PKC 活性(PKC 活化度)。
  • 样本1、组织样本; 2、培养细胞; 3、血细胞样本; 4、血清、血浆或细胞培养上清液; 5、各种体液。
  • 操作方法1.用预冷的匀浆器把细胞匀浆。 2.在 4℃,用 14,000 × g 离心裂解液 5 分钟,保存上清。 3.用 PKC 抽提液预平衡 1ml 的 DEAE 纤维素柱,再把第 2 步中得到的上清过柱。用 5ml 的 PKC 抽提液洗柱子,然后用 5ml 含有 200mM NaCl 的 PKC 抽提液洗脱含有 PKC 的组分。 4.用 PKC 稀释液(PKC dilution buffer)将少量蛋白激酶 C(Promtein Kinase C)稀释到 2.5ug/ml。随试剂盒所附的产品信息中标有这个酶的初始浓度。 5.用探头超声波破碎仪超声处理 PKC Activator Solution 20-30 秒,或直到溶液变温暖。 6.对每一个样品,按照下面所列顺序在 0.5ml 小离心管中混合 PepTag® PKC 5× Buffer,PepTag® C1 Peptide,超声过的 PKC Activator 5X Solution,和水。在样品加入之前,小离心管一直要放在冰上。阴性对照将用于对反应进行定量时确定其摩尔吸收值。
  • 运输组织样本:加入蛋白保护剂后加冰袋运输,或以干冰运输。
    细胞样本:加入蛋白保护剂后加冰袋运输,或以干冰运输;也可直接寄送培养瓶,但培养瓶需密封,并防止污染、破损、漏液。
    血清、血浆、上清液:以冰袋运输。
    体液:干冰运输
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  • 公司名称:北京嘉美臻元生物技术有限公司
  • 联系电话:400-000-7401 400-0007401
  • 产品介绍: 中文名称:PKC蛋白激酶活性检测
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