利拉洛肽

利那洛肽，又名醋酸利那洛肽，商品名为Linzess，是一种含有14个氨基酸的合成肽类结构，与内源性鸟苷肽家族相关，是FDA唯一批准的可用于临床的肠道局部起效的GC-C（鸟苷酸环化酶-C）激动剂类药物，可用于治疗便秘型肠易激综合征（IBS-C）和慢性特发性便秘（CIC）成年患者。

利那洛肽为白色至灰白色无定形粉末; 微溶于水和氯化钠水溶液(0.9%) 。

利那洛肽是一种鸟苷酸环化酶-C受体激动剂（GCCA），同时具有内脏镇痛效应和内分泌活性。利那洛肽及其活性代谢产物都可以与小肠上皮管腔表面的鸟苷酸环化酶-C（GC-C）受体结合。在动物模型中，通过GC-C的活化，利那洛肽可以减轻内脏疼痛，提高胃肠道转运速度，在人类中，该药物也可以提高结肠的转运速度。GC-C活化的结果即细胞内外cGMP（环鸟苷酸）浓度升高。细胞外cGMP可以降低疼痛神经纤维的活性，可减轻模型动物的内脏疼痛。细胞内cGMP可通过激活CFTR（囊性纤维化跨膜传导调节因子），增加小肠腔内氯化物和碳酸氢盐的分泌量，最终导致小肠液分泌增多和小肠转运速度增快。 虽然在临床研究中尚未在人中完全评价LINZESS的药理学效应，LINZESS曾显示用Bristol粪便形成计分(BSFS)和增加粪便频数测定大便的一致性变化。 吸收：口服给药后LINZESS吸收少生物利用度低。口服剂量145 μg或290 μg给药后利那洛肽及其活性代谢物的浓度血浆中低于定量低限。因此，不能计算标准药代动力学参数例如曲线下面积(AUC)，最高浓度(Cmax)，和半衰期(t?)。
分布：鉴于利那洛肽治疗的口服剂量的血药浓度，是无法衡量的，预计利那洛肽分布至组织很少。
代谢：利那洛肽在胃肠道内通过丢失末端酪氨酸部分被代谢为其主要，活性代谢物。利那洛肽及其代谢物在小肠腔内被蛋白解降解为较小肽和天然存在氨基酸。
消除：进食和空腹受试者每天给予290 μg的LINZESS共7天后在粪样品中回收活性肽平均约5% (空腹)和约3% (进食)和实际上所有为活性代谢物。
食物影响：在一项交叉研究中，18例健康受试者在进食和非进食状态给予LINZESS 290 μg共7天。血浆中没有检测到利那洛肽活其活性代谢物。在高脂肪早餐后立即服用LINZESS比空腹状态服用导致松散便和排便频数较高 [见剂量和给药方法(2.1，2.2)]。在临床试验中，在早餐前至少30分钟空胃给予LINZESS。 该药胶囊剂型，口服给药，每日一次。它可以缓解IBS-C导致的疼痛和便秘症状，以及CIC患者的便秘及排便困难表现。
药物的推荐治疗剂量为：便秘型肠易激综合征患者 290微克；慢性特发性便秘患者 145微克。每日首次进餐30分钟之前服用。 半选择性氧化形成三对二硫键合成利那洛肽利用Fmoc固相合成策略,Wang树脂为载体合成了3条[4Trt＋2Acm]和3条[2Trt＋4Acm]利那洛肽的线性前体化合物,在裂解树脂的同时脱去半胱氨酸上的Trt保护基,使用氯化血红素催化氧化的方法形成部分二硫键.下一步反应,使用了二苯亚砜[PhS(O)Ph]/三甲基氯硅烷(CH3SiCl3)体系,在TFA中脱除Acm保护基并形成剩余的二硫键.合成的6条线性前体肽中,有3条可以较高转化率得到利那洛肽,成功的将Acm保护的半胱氨酸应用于利那洛肽的合成中。
（1）多肽的合成
第1个氨基酸与树脂的偶联：称取Wang树脂（1g，0.72mmol/g）于25ml固相反应器中，用15mlCH2Cl2溶胀2h。称取Fmoc-Tyr（tBu）（0.99g，2.16mmol）、HBTU（0.82g，2.16mmol）、HOBT（0.29g，2.16mmol）溶于15mlDMF中，加入DIEA（1.82ml，11.04mmol）活化后加入固相反应器中，在室温下摇床震荡反应3h。加入乙酸酐∶吡啶∶DMF=2∶1∶3（V/V/V）（1×30min）进行封闭，依次用DMF（4×1min）、CH2Cl2（4×1min）、DMF（4×1min）洗涤树脂。
剩余氨基酸的偶联：按照利那洛肽的氨基酸序列，重复上述步骤进行偶联和脱Fmoc，每接完1个氨基酸以后，用Kasier试剂进行检测，脯氨酸（Pro）用溴酚蓝法检测，显色反应为阴性则进入下一个偶联循环，否则重复偶联步骤。
多肽的裂解：完成偶联后，称取多肽树脂放入反应瓶中，按照1g树脂5ml裂解剂的比例配置裂解液，在氮气保护下加入TFA∶水∶苯甲硫醚∶苯酚∶EDT=82.5∶5∶5∶5∶2.5（V/V/V/V/V）裂解2h后抽滤，加少量TFA和CH2Cl2洗涤3次，合并滤液，将得到的滤液用氮气吹去3/4体积后，滴入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀，离心得到相应的粗肽。
（2）多肽的纯化及分析
将得到的粗肽溶于少量水,用Waters600半制备液相,XB-C18制备柱进行纯化.高效液相条件,流动相A:水(含体积分数为0.1%的TFA);流动相B:乙腈(含体积分数为0.1%的TFA);流动相梯度:流动相B15%～50%(体积分数),20min;流速为3mL/min;检测波长220nm.收集主峰,旋转蒸发除去乙腈,冻干得到多肽纯品。
（3）二硫键的形成
氯化血红素催化氧化形成二硫键:称取脱除Trt保护基的利那洛肽线性前体肽(3mg,2μmol),溶于pH＝8.0的Tris-HCl的缓冲溶液(5mL)中,加入20%(物质的量比)的氯化血红素(含少量DIEA),室温敞口搅拌2h,反应结束用HPLC分析.PhS(O)Ph/CH3SiCl3脱Acm保护基并形成二硫键:称取多肽(0.6mg,0.4μmol),溶于TFA(0.4mL)中,加入CH3SiCl3(12μL,250equiv.),PhS(O)Ph(0.8mg,10equiv.),苯甲醚(4.3μL,100equiv.),室温敞口搅拌20min加入干燥乙醚(10mL),4mol/L醋酸(5mL)震荡,取水相进行HPLC分析并分离。
图2为半选择性策略氧化形成含三对二硫键的利那洛肽路线 用于治疗便秘肠易激综合征(IBS-C)和慢性特发性便秘(CIC)。
图3为Constella(利那洛肽) 利那洛肽的不良反应包括腹泻、腹痛和呕吐。 Linzess在6岁及以下儿童患者中禁用。6-17岁儿童患者不需禁忌该药物治疗。动物研究表明，成年鼠剂量利那洛肽治疗可导致幼鼠死亡。迄今尚未在儿童患者中开展过试验研究。报告最常见的Linzess治疗相关性副反应为腹泻。 1.http://news.medlive.cn/all/info-progress/show-49829_100.html.
2.卫高菲,程卯生. 利那洛肽[J]. 中国药物化学杂志,2013,(01):78.
3.http://yao.dxy.cn/article/37074?trace=related.