单碱基编辑的原理与应用
基因组编辑(简称为基因编辑)技术是利用人工核酸酶对基因组进行靶向修饰的遗传工程技术,是当今生命科学领域的研究热点。CRISPR/Cas9基因编辑系统虽然提高了基因敲除及定点修饰(包括定点突变及基因插入等)的效率,但是基于同源重组机制的基因定点突变效率仍然偏低。为了提高定点突变的效率,一项结合CRISPR/Cas9和胞嘧啶脱氨酶的单碱基编辑系统被相继报道。利用该系统可以在不产生双链DNA断裂的情况下,利用sgRNA将Cas9-胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶糖基化酶抑制子三者构成的融合蛋白靶向与gRNA(sgRNA中与目标DNA互补配对的序列)互补配对的靶位点,并将该靶位点的胞嘧啶(C)的氨基去除,从而使得C变成尿嘧啶(U),随着DNA的复制,U又会被胸腺嘧啶(T)替代,最终实现单碱基C→T的精确、高效突变。单碱基编辑技术为基因编辑技术的研究和应用增添了一种重要的工具。
2020-02-05
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