T4-DNA连接酶的应用
T4-DNA连接酶一种封闭DNA链上切口酶,借助ATP或NADP水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化形成磷酸二酯键。T4 DNA连接酶可催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需ATP作辅酶,不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接,也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。
2020-04-01
T4DNA连接酶的连接酶保真性
DNA连接酶(EC6。5。1。1)用于体外DNA连接、连接检测PCR,体内冈崎片断连接成完整基因组DNA有重要作用。基因工程所用DNA连接酶由公司提供,最常用的是T4DNA连接酶(T4Lig)。因为应用广泛并由公司提供,较多科研人员常忽略对其性质的全面了解,导致体外平端DNA连接效率很低,转化中出很多问题。
2020-04-01
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