T4 DNA连接酶新闻专题

在质粒构建过程中，T4 DNA连接酶连接效率不高问题可能主要包含以下几个方面，DNA底物的质量和末端状态，确保其是否符合连接要求。

T4-DNA连接酶一种封闭DNA链上切口酶，借助ATP或NADP水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化形成磷酸二酯键。T4 DNA连接酶可催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶，不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。

DNA连接酶（EC6。5。1。1）用于体外DNA连接、连接检测PCR，体内冈崎片断连接成完整基因组DNA有重要作用。基因工程所用DNA连接酶由公司提供，最常用的是T4DNA连接酶（T4Lig）。因为应用广泛并由公司提供，较多科研人员常忽略对其性质的全面了解，导致体外平端DNA连接效率很低，转化中出很多问题。