人肺癌组织源细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人肺癌组织源细胞提取物是从人原代肺癌组织源细胞提取的，人原代肺癌组织源细胞从人肺癌组织制备，人肺癌组织源细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。肺癌是发生于肺脏的癌病类疾病，为最常见的肺原发性恶性肿瘤，绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮，故亦称支气管肺癌。

来自新鲜或冷冻人体肺癌组织中高质量的总RNA，PCR准备的条cDNA链，蛋白质及其亚组分肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁的恶性肿瘤之一。肺癌起源于支气管粘膜上皮，局限于基底膜内者称为原位癌癌肿，可向支气管腔内或/和临近的肺组织生长，并可通过淋巴血行或经支气管转移扩散。癌瘤生长速度和转移扩散的情况，与癌瘤的组织学类型、分化程度等生物学特性有一定关系。临床上可将肺癌分为鳞形细胞癌(又称鳞癌)、未分化癌、腺癌和肺泡细胞癌。肺癌细胞呈上皮样，贴壁生长，具有无限增殖能力，丧失接触抑制现象，癌细胞间粘着性减弱。此外，易于被凝集素凝集，细胞骨架结构发生紊乱。

应用^[7-9]

人肺癌组织源细胞提取物可用于肺癌细胞无血清培养差异蛋白质组学研究方法的建立与应用：

最新的统计数字表明，肺癌的发病率和死亡率居各种恶性肿瘤之首，其中男性发病率为十万分之四十九点六，女性发病率为十万分之三十四。属于老年疾病的肺癌目前正在悄悄地“年轻化”，最年轻的肺癌患者仅有二十几岁。因此对肺癌的预防和早期诊断越发显得重要，但由于缺乏肺癌组织特异和时相特异的分子标志物，使得肺癌的早期诊断一直存在较大的困难，日益发展并完善的大规模蛋白质组研究技术，有望于用来发掘肺癌早期诊断的蛋白标志物。

蛋白质组是指细胞、组织或基因组所表达的全部蛋白质。在癌症蛋白质组学研究中，可以通过差异蛋白质组(功能蛋白质组)研究去发掘可能的药物标靶，以及适用于肿瘤分类、早期诊断、阻断和治疗的肿瘤标志物。

建立了肺癌组织细胞无血清培养模型，希望通过对同一病人正常组织和癌变组织来源的细胞在无血清培养过程中分泌蛋白质组的分析，找到差异表达的蛋白质，作为潜在的与肺癌相关的蛋白标志物，然后回到临床实验，检验它是否可以作为分子标志物，达到肺癌早期诊断的目的。

通过对无血清培养基样品的预处理、一维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离条件、胶内蛋白质酶解方法及鉴定等条件的优化，建立了无血清培养细胞分泌蛋白质组研究的技术方法，并在此基础上开展了差异蛋白质组研究，研究结果如下：建立了两种适用于无血清培养分泌蛋白质分离与鉴定的技术方法：一种是SDS-PAGE分离技术与生物质谱肽质量指纹谱(PMF)技术联用，通过SDS-PAGE分离找到差异蛋白质，然后采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索进行差异蛋白质鉴定；另一种方法是将SDS-PAGE分离与液相色谱-电喷雾串联质谱测序技术联用，对SDS-PAGE分离的蛋白质条带按一定的宽度切割并进行胶内蛋白酶切和肽段提取，用毛细管反相色谱-串联质谱(nanoLC-ESI-MS-MS)对混合蛋白质进行分离鉴定，对鉴定的蛋白质进行比较分析，找到差异表达蛋白质。

参考文献

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