小鼠淋巴成纤维细胞提取物的应用

背景^[1-5]

小鼠淋巴成纤维细胞提取物是从小鼠淋巴成纤维细胞提取的，小鼠淋巴成纤维细胞从正常小鼠淋巴组织制备。小鼠淋巴成纤维细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

淋巴系统（lymphatic system）是脉管系的一组成部分，由淋巴细胞、淋巴管、淋巴结及一些非淋巴结的淋巴组织或器官（如扁桃腺、脾脏及胸腺）所构成。淋巴腺的主要功能是过滤并对抗外来入侵的病毒及细菌，另外也制造淋巴球。淋巴球属于白血球的一种，它负责身体的免疫功能，人受伤以后组织会肿胀，要靠淋巴系统来排除积聚的液体，恢复正常的液体循环。

淋巴组织（lymphoid tissue），又称免疫组织（immune tissue）是以网状组织为基础，网孔中充满大量的淋巴细胞和一些巨噬细胞、浆细胞等。淋巴组织主要有两种形态。弥散淋巴组织（diffuse lymphoid tissue）无固定的形态，是以网状细胞和网状纤维形成支架，网孔中分布有大量松散的淋巴细胞，与周围的结缔组织无明显分界，除含有T、B淋巴细胞外，还有浆细胞和巨噬细胞、肥大细胞等。弥散淋巴组织中有毛细血管后微静脉（postcapillary venule），其特征是内皮为单层立方或矮柱状，故又称高内皮微静脉（high endothelial venule），是淋巴细胞由血液进入淋巴组织的重要通道。当弥散淋巴组织受抗原刺激时，可出现淋巴小结。

应用^[6][7]

可用于皮蝇素基因真核表达质粒的构建及其免疫特性的研究：

牛皮蝇蛆病主要是牛皮蝇和纹皮蝇的幼虫寄生在牛体内引起的一种寄生虫病。该病危害很严重,对养牛业和皮革加工业有着非常大的影响,而且妨碍公共卫生引发人畜共患病,现行的药物防治方法存在副作用,畜产品药物残留等缺点。以重组克隆载体pTHA和pTHC为模板,利用PCR技术和重叠延伸剪接技术,扩增HA-HC融合基因,连接到克隆载体pMD19-T simple vector中,构建重组克隆质粒pMD19-T-HAC(简称pTHAC)。

将HA、HC、HA-HC基因亚克隆到真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAXl-HA(简称pVHA)、pVAX1-HC(简称pVHC)和pVAXl-HAC简称pVHAC)c将各重组质粒体外转染小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞,检测目的基因的瞬时表达情况。在体内将各重组表达质粒和空载体pVAXl及PBS免疫昆明小鼠,共免疫3次,每次间隔2周,采8次血清,应用间接ELISA方法检测血清抗体效价。第3次免疫2周后,以纹皮蝇重组蛋白为刺激原,MTT法检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖情况；再以Y干扰素酶联免疫分析试剂盒检测小鼠脾脏淋巴细胞分泌的IFN-γ含量。

结果表明：与空载体pVAXl和PBS对照组相比,各重组表达质粒免疫组小鼠的抗体水平逐渐上升,差异极显著(P<0.01)。第3次免疫2周后,DNA疫苗免疫组的淋巴细胞增殖试验刺激值(SI)高于对照组,差异极显著(P<0.01)；双价DNA疫苗组的刺激值高于单价DNA疫苗pVHC组,低于单价DNA疫苗pVHA组,差异极显著(P<0.01)。DNA疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ高于两个对照组,差异极显著(P<0.01)。不论是单价DNA疫苗,还是双价DNA疫苗,在小鼠体内均能诱导体液免疫和细胞免疫应答,本实验为牛皮蝇蛆病新型疫苗的研究奠定了基础。

参考文献

[1]Immunohistochemical Characterization of Inflammatory Cells in the Skin of Cattle undergoing Repeated Infestations with Hypoderma lineatum(Diptera:Oestridae)Larvae[J].V.Dacal,C.López,D.D.Colwell,L.Vázquez,P.Díaz,P.Morrondo,P.Díez,R.Panadero.Journal of Comparative Pathology.2011(2)

[2]Efficacy of different dosages of ivermectin injectable against the Hypoderma spp.in yaks[J].Miling Ma,Guiquan Guan,Bingyi Lu,Aihong Liu,Zhijie Liu,Zengrong Chang,Faxing Li,Feng Chang,Jianxun Luo,Wenshun Lu,Qicai Zhang,Gailing Yuan,Hong Yin,Chantal Boulard.Veterinary Parasitology.2003(1)

[3]Effect of treatment on the dynamics of circulating hypodermin C in cattle naturally infested with Hypoderma lineatum(Diptera:Oestridae)[J].Veterinary Parasitology.2003(3)

[4]Protection against tuberculosis by a plasmid DNA vaccine[J].D.B.Lowrie,C.L.Silva,M.J.Colston,S.Ragno,R.E.Tascon.Vaccine.1997(8)

[5]Effects of adjuvants on bovine humoral and cellular responses to hypodermin A[J].John H.Pruett,Paul Stromberg.Veterinary Parasitology.1995(1)

[6]Immunization and par-enteral chemotherapy for the control of cattle grubs Hypoder-ma Lineatum.Khan M A,Connell R,Darcel C1eQ.Canadian J Comp Med Vet Sci.1960

[7]Attempts at vaccination against bovinehypodermyiasis with a vaccine containing crude collagenaseextracted from Hypoderma Lineatum1st stage larva.Magat A,Boulard C.C RAcad Sci Hebd Seances Acad Sci D.1970