大鼠肾成纤维细胞提取物的应用

背景^[1-6]

大鼠肾成纤维细胞提取物是从大鼠肾成纤维细胞提取的，大鼠肾成纤维细胞从正常大鼠肾成纤维组织制备。大鼠肾成纤维细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。

肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。

应用^[7][8]

可用于磷酸酶与张力蛋白同源物PTEN抑制TGFβ1刺激的大鼠肾成纤维细胞增殖及ColⅣ、FN分泌研究：

肾组织纤维化是所有慢性肾脏疾病导致终末期肾功能衰竭的主要病理机制。迄今仍无有效阻止肾组织纤维化发生发展的确切方法。现有的研究表明,细胞外基质(Extra cellular matrix,ECM)在肾组织的过度沉积是引起肾组织纤维化的主要原因,而肾成纤维细胞是肾组织中产生ECM的主要细胞。因此,能否阻止肾组织纤维化进程关键在于能否阻断肾成纤维细胞的过度增殖和分泌。

染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)是新近发现的一个肿瘤抑制基因。PTEN蛋白具有脂性磷酸酯酶活性和蛋白性磷酸酯酶活性,可以抑制磷酯酰肌醇三磷酸激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)信号传导通路并参与负性调控丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路。

通过观察转化生长因子β1(Transforming growth factor-beta,TGFβ1)刺激体外培养的大鼠肾成纤维细胞后,细胞表达PTEN的变化,以及PTEN蛋白对TGFβ1诱导的肾成纤维细胞增殖和分泌Ⅳ型胶原(CollagenⅣ,ColⅣ)、纤连蛋白(Fibronectin,FN)的影响,探讨PTEN蛋白在肾组织纤维化发生发展中的作用,为肾组织纤维化的防治提供新的思路。方法:1.分离、纯化、培养大鼠肾成纤维细胞,并用光电镜、免疫细胞化学进行细胞鉴定。2.转染携带PTEN基因的腺病毒及仅带绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因的空病毒载体,通过检测GFP阳性细胞比率了解转染效率。

参考文献

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[2]The phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway enhances Smad3-stimulated mesangial cell collagen I expression in response to transforming growth factor-beta1.Runyan CE,Schnaper HW,Poncelet AC.Journal of Biological Chemistry.2004

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[4]Autocrine TGFβsupports growth and survival of human breast cancer MDA-MB-231 cells.Lei X,Bandyopadhyay A,Le T,et al.Oncegene.2002

[5]Genetic deletion of the pten tumor suppressor gene promotes cell motility by activation of Rac1 and Cdc42 GTPases.Liliental J,Moon SY,Lesche R,et al.Current Biology.2000

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[7]TGF-beta and fibrosis.Branton MH,Kopp JB.Microbes and Infection.1999

[8]Hepatocyte-specific pten-deficient mice as a novel model for nonalcoholic steatohepatitis and hepatocellular carcinoma.Sumio W,Yasuo H,Akira S,et al.Hepatology Research.2005

[9]程悦.磷酸酶与张力蛋白同源物PTEN抑制TGFβ1刺激的大鼠肾成纤维细胞增殖及ColⅣ、FN分泌[D].第三军医大学,2006.