小鼠肠巨噬细胞提取物的应用

背景^[1-6]

小鼠肠巨噬细胞提取物是从小鼠原代肠巨噬细胞提取的，小鼠原代肠巨噬细胞从正常小鼠肠组织制备。小鼠肠巨噬细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。

巨噬细胞（英语：Macrophages，缩写为mø）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。

它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW264.7等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：

1、实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。

2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

3、置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。

4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。

5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

6、小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g4℃离心10分钟，去上清，加10mlEagle培养基。

7、计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105细胞，其中90%为巨噬细胞。

8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106/ml。

9、为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1～2次后，再加新Eagle培养液置37℃，5%CO2温箱中培养。

应用^[7][8]

小鼠肠巨噬细胞提取物可用于玉竹提取物A对小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子产生的影响研究：

玉竹提取物A是一种醇水提取物,经研究发现其具有抑制细胞免疫功能和炎症反应的特点,前期试验已经证明一定浓度的玉竹提取物A可以抑制炎症细胞释放IL-1和TNF-a等促炎症细胞因子,鉴于玉竹提取物A具有低毒和安全的特点,进一步研究其在抗炎方面的作用和机制是非常必要的。一氧化氮(Nitric oxide,NO)参与炎症及免疫反应等过程,在病理情况下合成的大量NO会引起急、慢性炎症反应。内源性的NO是由一氧化氮合成酶州Osynthase,NOS)氧化L-精氨酸(L-Arg)产生的。

NOS有三种同功酶即内皮型(endothelial NOS,eNOS或NOS-Ⅲ)、神经型(neuronal NOS,nNOS或NOS-Ⅰ)和诱生型(inducible NOS,iNOS或NOS-Ⅱ)。iNOS只在炎症细胞受到刺激被激活后才表达,尤其是巨噬细胞。iNOS主要存在于细胞质中,诱导iNOS的刺激物包括血红素、脂多糖、细胞因子IFN-γ、TNF-a和IL-1α等。许多实验已经证实,体内iNOS被激活后,释放出的大量NO与多种病理改变相关,包括组织损伤和多种炎症疾病、神经疾病和自身免疫性疾病等。因此,选择性的抑制iNOS进而抑制过量NO产生,将对以上疾病的治疗具有一定的应用前景。

iNOS抑制剂具有阻断炎症信息传递通道的作用,有效地抑制iNOS不仅能在初始阶段影响炎症的发生,也对抑制和终结炎症有作用。

参考文献

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[6]Accumulation of the xanthophyll lutein in skin amyloid deposits of systemic amyloidosis.Bruch-Gerharz D,Stahl W,Gerharz CD,et al.The Journal of Investing.2001

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[8]庞维.玉竹提取物A对小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子产生的影响[D].中国医科大学,2010.