人脉络膜组织提取物的应用

背景^[1-4]

人脉络膜组织提取物是通过酶解法从人脉络膜组织提取的一类细胞的混合物。

脉络膜位于视网膜和巩膜之间，是一层柔软光滑、具有弹性和富有血管的棕色薄膜。它起于前部的锯齿缘，后止于视神经周围；内面借一层十分光滑的玻璃膜与视网膜的色素上皮层相联系，外面借一潜在性间隙与巩膜相接，有脉络膜周层的细微纤维小板伸展而混入巩膜棕黑板中，并有血管和神经由此穿过。脉络膜主要有血管所构成，其厚度常因血管的充盈状态而有很大的变异，根据一般测量，脉络膜的前部较薄，约0.1毫米，后部较厚，约0.22毫米，而在黄斑部特别厚。

脉络膜的主要作用是营养视网膜外层，相当于供给大脑营养的软-蛛网膜；其次能阻断透入巩膜进入眼内的光线，以保证成像清晰。胚胎学上脉络膜来源于中胚叶和神经外胚叶，脉络膜上腔、脉络膜血管层和弹力组织来自中胚叶；色素上皮层及视网膜内九层来自神经外胚叶。

脉络膜的组织结构由外向内分为五层：

1.脉络膜上腔层，由结缔组织细束和巩膜连接，含有弹力纤维、色素细胞和平滑肌纤维等。睫状后长、后短动脉及睫状神经均由此穿过。

2.大血管层，由动脉和互相吻合的静脉构成，各血管之间有色素细胞和少量平滑肌纤维。这层的动脉主要由睫状后动脉分支。

3.中血管层，与大血管层间无明显分界，仅血管逐渐变细。黄斑部无大血管层，仅有排列较紧密的中血管层。本层色素较少。

4.毛细血管层，为一层毛细血管，无色素。

5.玻璃膜，位于视网膜和脉络膜之间，由视乳头附近向周边部变薄。光镜观察可分为内外两层；内为表皮层，即色素上皮基底膜，外为弹力层。

应用^[5][6]

人脉络膜组织提取物可用于KCTD12基因过表达对脉络膜黑色素瘤细胞生物学功能的影响：

人类钾离子通道四聚体结构域蛋白12(KCTD12,也称为Pfetin)是KCTD家族26个成员之一。KCTD12调节GABAB受体信号的激动剂效力和动力学效应。蛋白质组学分析表明KCTD12可能是判断胃肠道间质瘤预后潜在的生物标志物。然而,很少有报道关于KCTD12对其他肿瘤类型的作用。葡萄膜黑色素瘤通常指发生在脉络膜,睫状体或虹膜上的黑色素瘤。葡萄膜黑色素瘤是最常见的成人原发性眼内恶性肿瘤。

在美国,这些癌症的发生率是5%,其中85%是葡萄膜原发。葡萄膜黑色素瘤患者早期表现为无痛性视力下降,后期则可导致视网膜脱离。此外,葡萄膜黑色素瘤具有高度转移性,患者黑色素瘤可能转移到肝脏,肺或者皮肤。因此,葡萄膜黑色素瘤患者有高达一半的死亡率。葡萄膜黑色素瘤肿瘤的发生和转移是复杂过程。到目前为止,尚无研究KCTD12对葡萄膜黑素瘤影响的相关研究。

构建了真核过表达载体PC3.1-KCTD12,瞬转人类脉络膜黑素瘤细胞系(OCM-1),发现过表达KCTD12可以上调肿瘤上皮组织标志蛋白E-cad的表达及降低肿瘤上皮组织间质化(EMT)标志蛋白Vimitin的表达。构建慢病毒核心质粒p LVX-Puro-KCTD12,筛选出稳定表达KCTD12的OCM-1细胞系。我们将得到的细胞系进行RNA-Sequencing检测,并对数据进行生物信息学分析。发现基因表达水平变化主要包括增殖,细胞黏附,细胞凋亡,血管生成等方面。

结果表明过表达KCTD12的OCM-1细胞中G2/M到G1期的过程时间延长。另外,KCTD12过表达OCM-1细胞抑制了裸鼠体内异种移植物的生长。最后,实验还构建了PGEX-4T-KCTD12全长和部分片段的载体,进行原核表达,并纯化了带GST及HIS标签的KCTD12全长及部分片段的融合蛋白。用全长部分蛋白验证对OCM-1细胞的生物学作用,并用部分片段蛋白免疫小鼠制备了鼠源性抗体。总的来说,过表达KCTD12具有抑制OCM-1细胞生长的作用,未来有可能作为治疗脉络膜黑色素瘤的新型治疗靶标。

参考文献

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