人角膜上皮细胞提取物的应用

背景^[1-5]

人角膜上皮细胞提取物是从人原代角膜上皮细胞提取的，人原代角膜上皮细胞从正常人角膜上皮组织制备。正常人角膜上皮组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。人角膜上皮细胞提人角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能。角膜包含三个不同的细胞层，外层是上皮细胞，内层是内皮细胞，中间层基质层（角膜细胞）。

角膜上皮细胞能参与先天性免疫，它能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统。还能高效表达醛脱氢酶，防止UV-和4-羟基壬烯醛对细胞造成伤害。角膜内皮细胞增殖是由细胞因子控制的，比如说表皮生长因子，它能激活上皮细胞深层的同源受体。体外培养角膜内皮细胞已经可以替代检测动物眼睛的产物而用于毒理学检测和人角膜上皮细胞分化的分子机制的研究。人角膜上皮细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

角膜内皮细胞增殖是由细胞因子控制的，比如说表皮生长因子，它能激活上皮细胞深层的同源受体。体外培养角膜内皮细胞已经可以替代检测动物眼睛的产物而用于毒理学检测和人角膜上皮细胞分化的分子机制的研究。

应用^[6][7]

可用于IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制及地塞米松对其抑制作用的研究：

IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制研究背景：IL-1β是一种促炎细胞因子,它在调控固有免疫反应和适应性免疫应答中均发挥了重要作用。研究表明在多种角膜炎症性疾病患者的泪液和角膜组织中,IL-1β水平有明显升高(和正常对照比较),如单疱病毒性角膜炎、细菌性角膜炎、角膜热/化学烧伤、胬肉和角膜移植排斥等。此外,IL-1β可以诱导角膜上皮细胞,角膜基质细胞和角膜内皮细胞产生多种炎症因子,包括IL-6,IL-8,TNFa,COX2,iNOS,MCP-1,MIP-3和ICAM-1等,提示IL-1β广泛地参与了角膜的炎症过程。IL-6和IL-8是两种重要的炎症效应分子。IL-6是多功能的细胞因子,它同时具有促炎和抗炎作用。IL-8是白细胞的趋化因子和活化因子。

正常情况下,角膜组织和泪液中几乎检测不到IL-6和IL-8的表达。然而,多种角膜炎症性疾病患者的泪液和角膜组织中检测到了IL-6和IL-8的高表达(和正常对照比较),提示这两种炎症细胞因子在角膜炎症中也扮演了重要的角色。多种促炎细胞因子、细菌和病毒产物等都能够快速而显著地诱导IL-6和IL-8的表达,其中IL-1β是其主要的诱导因子。

通过细胞免疫荧光染色技术检测给予和不给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB亚基p65的亚细胞定位以及分别单独抑制三条MAPKs信号通路后再给予IL-1β刺激的HCECs p65的亚细胞定位；行双荧光素酶报告基因检测技术检测给予和不给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的转录活性及分别单独抑制三条MAPKs信号通路后再给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的转录活性。

创新性结论：1.p38,JNK和NF-κB信号通路介导了IL-1β诱导HCECs产生IL-6；2.ERK1/2,p38,JNK和NF-κB信号通路介导了IL-1β诱导HCECs产生IL-8；3.p38信号通路介导了IL-1β对HCECs NF-κB转录活性的上调。

参考文献

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[6]Matrix Metalloproteinase 9 and Transglutaminase 2 Expression at the Ocular Surface in Patients with Different Forms of Dry Eye Disease[J].Pasquale Aragona,M’Hammed Aguennouz,Laura Rania,Elisa Postorino,Margherita Serena Sommario,Anna Maria Roszkowska,Maria Grazia De Pasquale,Antonina Pisani,Domenico Puzzolo.Ophthalmology.2014

[7]周卫萍.IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制及地塞米松对其抑制作用的研究[D].浙江大学,2015.