大鼠神经小胶质细胞提取物的应用

背景^[1-5]

大鼠神经小胶质细胞提取物分离自正常大鼠小脑组织，主要功能：

（1）神经胶质出现在大脑发育早期向成熟阶段转化的过程中。

（2）当程序性细胞死亡时，或在大脑发育的过程中，中枢神经系统受损或受到病理损坏时，神经胶质可做为大脑的巨噬细胞。

（3）胶质细胞能在II类组织相容性复合体表达CD-4阳性Ｔ细胞时表达抗原，能进行Fc介导的巨噬作用，并且与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

小胶质细胞分布于整个中枢系统，是中枢神经系统最小的一种胶质细胞，约占整个胶质细胞的5-10%。作为常驻中枢神经系统的免疫效应细胞，小胶质细胞及其介导的神经炎症在中枢神经系统的损伤及疾病的转归过程中起着非常重要的作用。神经是神经纤维构成的组织,把脑和脊髓的兴奋传给各个器官或把各个器官的兴奋传给脑和脊髓。

其中，鼠神经小胶质细胞是神经胶质形成的主要功能细胞。神经胶质出现在大脑发育早期向成熟阶段转化的过程中，当程序性细胞死亡时，或在大脑发育的过程中，中枢神经系统受损或受到病理损坏时，神经胶质可做为大脑的巨噬细胞。胶质细胞能在II类组织相容性复合体表达CD-4阳性Ｔ细胞时表达抗原，能进行Fc介导的巨噬作用，并且与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

细胞特性1)组织来源于实验动物的正常脑组织。2)细胞鉴定：CD68免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：圆形细胞，不规则细胞，贴壁培养。大鼠神经小胶质细胞注意事项:培养基于4℃条件下可保存3-6个月。在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。该细胞只可用于科研。

应用^[6][7]

可用于GX-50对淀粉样蛋白诱导小胶质细胞炎症反应的影响：

小胶质细胞是中枢神经系统中主要的免疫细胞,在阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）的发生发展过程中起着非常重要的作用。淀粉样蛋白沉积形成的老年斑是AD特征性病理表现之一,其主要成分β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）可以激活小胶质细胞,激活后的小胶质细胞可吞噬和清除Aβ或Aβ-Aβ受体复合物,降低Aβ对神经元的损伤,同时也可以释放出大量的炎性介质等毒性物质,从而引起神经元损伤,促进AD的发展。

随着对小胶质细胞参与AD发生发展过程的深入认识,以小胶质细胞为靶标,针对抑制其激活以及炎性因子的产生,或在细胞表面受体中寻找新靶点以提高清除Aβ能力的研究已成为AD防治药物开发领域的热点。

研究目的:GX-50是从花椒中提取的一种有效成分,通过药物软件分析发现其结构能够激活α7烟碱型乙酰胆碱受体。前期实验探讨了GX-50对淀粉样蛋白诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响,发现GX-50能够和大鼠皮质神经细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体结合,有效抑制Aβ诱导的皮质神经细胞凋亡,并能够抑制LPS诱导的巨噬细胞释放炎性因子。根据配体和其受体结合亲和力的大小,我们选用了不同浓度的Aβ和GX-50处理大鼠原代培养的小胶质细胞,MTT和LDH法检测其对细胞活性的影响。

用受体结合竞争性结合实验检测GX-50与小胶质细胞表面α7烟碱型乙酰胆碱受体的结合能力。用酶联免疫吸附试验和细胞因子蛋白芯片检测GX-50预处理后对淀粉样蛋白诱导小胶质细胞分泌炎性因子的影响。结果:MTT和LDH检测的结果显示1×10-8～10-4M的GX-50,10～50μM的Aβ对小胶质细胞的活性没有显著影响。并且GX-50可以竞争性地与小胶质细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体结合。根据使α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂尼古丁和其受体达到亲和力时的最低浓度,我们选取了1×10-6M的GX-50预处理胞,然后再加入Aβ处理细胞。

结果显示加入GX-50后TNF-α的分泌量被抑制了28.26%,IL-1β的分泌量被抑制了35.37%（p<0.05）。加入乙酰胆碱受体拮抗剂银环蛇毒素后,抑制作用减弱。结论:综上所述,GX-50能够与小胶质细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体结合,并有效地抑制Aβ诱导的小胶质细胞分泌炎性因子,但具体的作用机制还需做进一步的研究证实。

参考文献

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[7]魏海玲.GX-50对淀粉样蛋白诱导小胶质细胞炎症反应的影响[D].上海交通大学,2011.