小鼠皮下脂肪细胞试剂盒的应用

背景^[1-4]

小鼠皮下脂肪细胞试剂盒用于优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞（如纤维细胞等）的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，小鼠皮下脂肪细胞传5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。保证细胞的纯度在90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。皮下脂肪主要分为两种脂肪细胞，白色脂肪细胞（单泡脂肪细胞）和褐色脂肪细胞（多泡脂肪细胞）。典型的白色脂肪细胞中含有一滴大大的，由膜包裹的油滴，细胞质含量非常少，细胞核挤在一边，呈扁平型。

褐色脂肪细胞含有许多小的油滴分散在细胞质内，细胞核呈圆形，因含有大量线粒体而呈现棕色。棕色脂肪细胞主要功能是大量产热，在婴儿期大量存在，保证婴儿的供暖（所以婴儿其实并不怎么怕冷，同样条件下儿童比成人抗冻的多），成年过程中慢慢退化，变成类似白色脂肪细胞的组织。（成年冬眠动物中含量很大）。新近研究显示成年人也有褐色脂肪细胞，主要存在于颈部等裸露在外的地方。寒冷处理使其更加可见。

两种细胞的来源不同，研究显示棕色脂肪细胞和骨骼肌细胞由同一干细胞发育而来，其成熟细胞上也带有相同的标记分子(Myf5)，而白色脂肪细胞不带有。在转录因子PRDM16存在的情况下，骨骼肌细胞可以转为褐色脂肪细胞，缺少转录因子PRDM16的情况下褐色脂肪细胞可转为骨骼肌细胞。说明褐色脂肪细胞更加类似于骨骼肌细胞。或许只有白色脂肪细胞才是人体真正用来贮存脂肪的细胞，而褐色脂肪细胞更加类似于利用能量的功能性细胞，肌肉细胞利用糖和脂肪产生能量运动，棕色脂肪细胞利用脂肪产生能量放热。

小鼠皮下脂肪细胞主要存在于结缔组织中，能够合成和贮存脂肪。成熟的脂肪细胞呈圆形，胞浆内富含脂滴。脂肪细胞在脂类代谢，能量平衡以及抵抗炎症等方面起重要作用，与肥胖，高血脂、糖尿病、乳癌等多种生理疾病密切相关。小鼠皮下脂肪细胞来源于小鼠脂肪组织，皮下脂肪细胞主要功能：

（1）脂肪细胞能储存能量并参与身体代谢。

（2）脂肪细胞分化是一个发展的过程，它对代谢稳态和营养信号很重要。

（3）前脂肪细胞存在于小鼠脂肪组织中，能根据能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪细胞。前体细胞的增殖和分化能够增加脂肪组织的体积。

前脂肪细胞与脂肪分化以及许多生理病理过程密切相关，如脂肪代谢、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌，所以小鼠皮下脂肪细胞对这些疾病的研究提供素材。

应用^[5][6]

小鼠皮下脂肪细胞试剂盒可用于内脏脂肪棕色化功能改变影响肥胖的分子机制研究：

近年来,在白色脂肪被发现也具有向棕色脂肪方向分化的特性后,白色脂肪棕色化在肥胖中的研究逐渐成为热点。MicroRNA(微小RNA,miRNA)在各种生物过程,包括脂肪细胞分化、合成代谢、胰岛素抵抗和食欲调节中发挥重要的调控作用。而且,MiRNA的作用具有组织特异性,对基因的调控更为精细,目前已成为研究热点。而调控白色脂肪棕色化的机理尚不清楚,与多种因素和转录因子有关。关于miRNA在白色脂肪棕色化方面的调控作用至今鲜有报道。

利用饮食诱导肥胖小鼠模型、肥胖人群和原代内脏脂肪细胞模型,以及miR-27b--本课题组在白色脂肪棕色化的其他研究中发现的miRNA,证实肥胖时小鼠和人内脏脂肪棕色化功能均下降,阐述miR-27b调控白色脂肪棕色化的分子机制--通过调控脂肪棕色化功能的关键转录因子Prdm16。进一步通过体内抑制miR-27b的作用,发现干涉miR-27b可以逆转肥胖时内脏脂肪棕色化功能的下降,改善机体胰岛素敏感性,为内脏肥胖及其代谢并发症的治疗提供新的策略。

体外采用酶消化法分离培养3周龄C57BL/6J、鼠原代内脏前脂肪细胞,利用LNA修饰的anti-miR-27b或Pre-miRTM miR-27b Precursor片段(miminc-miR-27b)干涉或过表达miR-27b,诱导分化前脂肪细胞；实时荧光定量PCR检测棕色化标志基因Ucp1,Prdm16,Cidea,Cox8b和Pgcla的表达：Western blot检测Ucp1和Prdm16的蛋白表达；Seahorse XF24Extracellular Flux Analyzer测定细胞耗氧率。

参考文献

[1]MicroRNA-133 Controls Brown Adipose Determination in Skeletal Muscle Satellite Cells by Targeting Prdm16[J].Hang Yin,Alessandra Pasut,Vahab D.Soleimani,C.Florian Bentzinger,Ghadi Antoun,Stephanie Thorn,Patrick Seale,Pasan Fernando,Wilfred van IJcken,Frank Grosveld,Robert A.Dekemp,Robert Boushel,Mary-Ellen Harper,Michael A.Rudnicki.Cell Metabolism.2013(2)

[2]Increase in Brown Adipose Tissue Activity after Weight Loss in Morbidly Obese Subjects[J].G.H.E.J.Vijgen,N.D.Bouvy,G.J.J.Teule,B.Brans,J.Hoeks,P.Schrauwen,W.D.van Marken Lichtenbelt.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2012(7)

[3]PPARγagonists Induce a White-to-Brown Fat Conversion through Stabilization of PRDM16 Protein[J].Haruya Ohno,Kosaku Shinoda,Bruce M.Spiegelman,Shingo Kajimura.Cell Metabolism.2012(3)

[4]Beige Adipocytes Are a Distinct Type of Thermogenic Fat Cell in Mouse and Human[J].Cell.2012(2)

[5]The Adipose Tissue as an Endocrine Organ[J].Marcin Adamczak,Andrzej Wiecek.Seminars in Nephrology.2012

[6]俞静.内脏脂肪棕色化功能改变影响肥胖的分子机制研究[D].南京医科大学,2013.