大鼠心肌细胞的应用

背景^[1-5]

大鼠心肌细胞构成心壁的主要成分，为心脏博动的物质基础。心肌细胞根据其生理功能可分为两类,即工作性心肌细胞和传导性心肌细胞。其中工作性心肌细胞构成心房肌和心室肌,是心壁的主要组成部分,具有兴奋、传导和收缩的功能;而自律性心肌细胞组成心脏的传导系统,包括窦房结、结间束、房室交界、左右束支和普肯耶纤维网。它们除有兴奋、传导的功能外,还有自律性,即不受神经支配与体液的影响,有产生周期性兴奋的能力。窦房结兴奋,将冲动扩布到心肌,引起心肌的收缩,从而产生心肌细胞的生物电现象。所以心肌细胞具有兴奋性、自律性、传导性和收缩性四种生理特性。大鼠心肌细胞传3-5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。属于原代生长细胞，培养过程较为繁琐。

文献上有多种浓度胰酶消化方法，0.06%浓度的胰酶对细胞损害较小，但这个浓度消化所需时间较长。采取多次反复低浓度消化的方法，每次消化一些后，用吸管抽取出上清液，离心所得即为心肌细胞。利用心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同，采用差速贴壁1.5 h，充分去除成纤维类细胞，达到纯化的目的。成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状，并且会增殖，不搏动，很好和心肌细胞鉴别。消化和吹打一定不要过度，是保证心肌细胞活力最重要的一个原则。而接种密度(一般不低于105/ml)，也将影响到心肌细胞的搏动及同步化搏动。大鼠心肌细胞刚接种时形状为圆形或椭圆形，大约在24 h左右基本贴壁，此时细胞伸出伪足，伪足在镜下为纤维状条索，细胞胞体则呈现不规则形状，如多角形，部分细胞有聚集倾向，细胞搏动效果较好，DMEM培养基在初始培养时为深红色，两天后变为淡黄色，应该是营养成分下降的表现，也说明细胞生长状况良好。

应用^[6][7]

用于高同型半胱氨酸对高血压大鼠心肌细胞GRP78和CHOP的影响与左室肥厚的关系及依叶片的干预作用

高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteine,HHcy)是指血清中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度高于10μmol/L。我国学者将伴有血清Hcy水平升高的原发性高血压称为′H型μ高血压。我国约有1.5亿人患′H型μ高血压，其发病率远高于国外。HHcy与高血压具有协同危害作用，HHcy加重了高血压对靶器官的损害。近年临床研究表明，血清Hcy的水平与高血压左室肥厚有密切的关系，但尚未有确切的证据显示血清Hcy水平的升高与高血压左室肥厚的发生发展有直接相关性。高Hcy的致病途径复杂，多种分子机制包括内皮细胞功能障碍、血管平滑肌细胞增生、血小板凝聚、胰岛素抵抗、促凝及抗凝机制失衡等可能参与了冠心病、动脉粥样硬化、高血压、脑卒中等相关心脑血管疾病的发生发展，但高Hcy对高血压左室肥厚影响的分子机制研究甚少。

本课题组以往研究证实，内质网应激(Endoplasmic ReticulumStress，ERS)为高血压所致左室肥厚的分子机制之一。多种原因所致外周小动脉收缩，血压升高，心脏压力负荷增加，触发心肌细胞ERS，ERS保护因子GRP78、GRP94等与应激促凋亡因子CHOP、caspase12等表达失衡，持久剧烈的应激导致促凋亡因子表达占优势，介导心肌细胞肥大凋亡，临床上最终出现左室肥厚。然而，ERS是否为HHcy对高血压左室肥厚作用的分子机制之一尚未可知。依那普利叶酸片（简称依叶片）是二代血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)与叶酸以10mg/0.8mg配制的新型复合制剂，临床上用于治疗伴有HHcy的原发性高血压患者。依那普利主要通过抑制RAS系统产生降压作用，叶酸能够促进Hcy甲基化过程，降低血清Hcy。研究表明，依叶片不仅降低血压及血清Hcy水平，还能降低相关心血管不良事件的发生率。但其对伴HHcy的高血压左室肥厚的干预效果及干预机制目前尚不清楚。基于上述研究状况，本实验将采用腹主动脉缩窄术及高蛋氨酸饮食建立高血压伴HHcy大鼠模型，并使用依那普利叶酸片进行干预治疗。

参考文献

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