清洁印迹IP检测试剂盒的应用

背景^[1-6]

Clean-Blot IP Detection Kit(HRP)含有足够的Clean-Blot IP检测试剂和附件试剂，可用于25个微量印迹或2000 cm2的膜。Clean-Blot IP Detection Reagent是一种辣根过氧化物酶偶联物，针对免疫沉淀后的一级抗体Western印迹检测进行了优化，不受变性IP抗体片段的干扰。Clean-Blot IP Reagent可在IP检测（免疫沉淀）后对目标蛋白进行无故障的Western印迹检测。

它通过特异性结合功能性一抗（完整IgG）而不与IP抗体的片段结合起作用，所述IP抗体片段通常通过电泳和膜转移伴随免疫沉淀的蛋白质。Clean-Blot IP试剂和试剂盒消除了用于初始免疫沉淀试验的抗体的重链（约50kDa）和轻链（25kDa）IgG片段的检测干扰。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。

再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

Clean-Blot IP检测试剂的特点：

1.通用-结合并检测大多数物种，IgG亚类和一级抗体的同种型，通常用于蛋白质印迹

2.兼容-使用蛋白A，蛋白G或抗IgG琼脂糖珠和任何阻断缓冲液进行IP分析有效

3.具有成本效益-消除与共价固定IP抗体相关的成本和额外工作，作为克服蛋白质印迹干扰的手段

4.灵活的-辣根过氧化物酶（HRP）试剂，用于化学发光，荧光或比色底物的检测

5.易于使用-无需更改Western印迹方案;简单地用Clean-Blot IP检测试剂取代传统的二级HRP共轭物

6.无阻碍检测-clear蛋白质印迹结果用于免疫沉淀试验，没有来自变性IgG条带的显着干扰

应用^[7-9]

可用于免疫沉淀筛选与双剪接型2.2Kb HBV剪接变异体特异性蛋白HBDSP相互作用的肝细胞蛋白：

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是一种部分双链环状嗜肝DNA病毒，在医学和公共卫生上具有重要的意义。从世界范围来看，大约有350000000的人感染乙肝病毒，其中亚洲地区占了75%。HBV是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要致病原因，每年导致1000000人死亡。HBV基因组剪接变异体(spliced variants of hepatitis B virus genomes)是由3.5Kb前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)经剪接后逆转录而成的一类亚基因组DNA。其中长度为2.2kb的HBV剪接变异体占了80%以上，其剪接类型分为单剪接型和双剪接型，对2.2Kb HBV剪接变异体的功能研究显示，此类变异体可能导致肝细胞凋亡并与HBV的持续性感染密切相关，但其确切致病机制迄今未明。

本研究旨在利用免疫沉淀技术探索能够与双剪接型2.2Kb剪接变异体编码的剪接特异性新蛋白（Hepatitis B Doubly Spliced Protein,HBDSP）相互作用的肝细胞蛋白，以此深入了解其致病性。进一步通过GST pull-down实验证实HBDSP与TFII-I蛋白在体外具有相互作用。TFII-I蛋白是一个多功能转录因子，不仅能够促进染色质重塑，同时在细胞有丝分裂周期中具有重要作用。HBDSP与TFII-I的相互作用，可能影响肝癌细胞的分裂和增殖。本研究为深入探讨HBDSP的致病性奠定基础。

参考文献

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